实验猕猴病原细菌的形态学检查操作标准

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1、实验獗猴病原细菌的形态学检查操作标准实验狒猴病原细菌的形态学检查标准编号：SCHS-GL-2013-005审核人：胡宗秀批准人：王正武变更日期：版本：2013审核日期：2013-1-1批准日期：2013-2-1页码:实验獗猴病原细菌的形态学检查常规1.冃的：此标准用于规范四川宜宾横竖牛物科技有限公司实验獗猴病原菌的形态检查。2.范围适用于本公司实验獗猴疾病动物模型及患病猫猴的病原体形态学检查的相关工作人员。3.形态学检查常用显微镜介绍在细菌的形态学检查中以光学显微镜最为常用，借助显微镜放人至1000倍左右可以观

2、察到细菌的一般形态和结构，至于细菌内部的超微结构,则需经电子显微镜放大数万倍以上才能看清。检查细菌常用的显微镜有以下几种：3.1普通光学显微镜普通光学显微镜(lightmicroscope)通常以自然光或灯光为光源，其波长约0.5um.在最佳条件下，显微镜的最大分辨率为波长一半，即0.25Pm的微粒放大到的最小形象为0.2mm,故在普通光学显微镜放大1000倍，可将0.25Um的微粒放大到0.25mm肉眼便可能看清，一般细菌大于0.25Mm,故用普通光学显微镜均能清楚看到。3.2暗视野显微镜暗视野显镜(dark

3、fieldmicroscope)是用特制的暗视野集学器代替普通光学显微镜上的明视野集光器，由于暗视野集光器的中央为不透光的遮板，光线不能直接射入镜简，故背景视野黑暗无光,而从集光器四周边缘斜射到标本部位的光线，经菌体散射后进入物镜。故在强光的照射下，可以在黑暗的背景中看到发亮的菌体，犹如夜空中的明亮星星，明暗反差提高了观察的效果，多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动以观察。编号：审核人：批准人：变更日期：实验猫猴病原细菌的形态学检查常规版本：审核日期：批准日期：页码：3.3相差显微镜，在进行未染色标本检

4、查时，由于细菌的折旋光性与周围环境的折旋光性相近，明暗对比不明显，在普通光学显微镜下不易看清，用暗视野显微镜只能看到发亮的菌体轮廓，看不清内部结构。而相差显微镜(phasecontrastmiroscope)依据光波穿过标本中密度不同的部位时,引起光相差异的原理，利用相差板的光栅作用，改变直射光的光相和振幅,将光相的差异转换成光的强度的差异，使细菌中的某部分结构比其它部分深暗，衬托出鲜明的对比。木法主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。3.4荧光显微镜荧光显微镜(fluorescencemicrosco

5、pe)以紫外光或蓝紫光为光源，能激发荧光物质发光使之成为可见光。细菌经荧光色素染色后，置于荧光显微镜下，即可激发荧光，因此在暗色的背景下可以看到发射荧光的细菌。由于紫外光与蓝紫光的波长较短(0.3—0.4um),故分辨率得到进一步提高。荧光显微镜还广泛应用于免疫荧光技术中。3.5电子显微镜电子显微镜(electronmicroscope)以电子流代替光源,其波长极短(约为0.005nm),分辨能力大大提高，电磁圈代替普通显微镜的光学放大系统，放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨lnm的物体，细菌的表面形态和内部超

6、微结构均能清楚地显现。电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显微镜。前者适于观察细菌内部的超微结构，后者适于对细菌表面结构及附件的观察。用电子显微镜观察，标本需经特殊制片，在干燥真空的状态下检查，而不能观察到活的微生物。1.不染色细菌标本的检查细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。常用的方法有压滴法和悬滴法，以普通光学显微镜观察。细菌如有动力，可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移；细菌如无动力，受水分子撞击细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。如用暗视野显微镜或相差显

7、微镜观察，则效果更好。・2・编号：审核人：批准人：变更日期：实验獗猴病原细菌的形态学检查常规版本：审核日期：批准日期：页码：在临床上，有时通过不染色标本的动力检查可对某些病原菌作岀初步鉴定。如疑似霍乱患者，取其水样便，制成悬滴标本或压滴标本，高倍镜或暗视野下观察细菌动力，若见来回穿梭似流星状运动的细菌，同法重新制备另一标本并加入01群霍乱弧菌诊断血清，如果原运动活泼的现象停止（为制动试验阳性），可初步推断为“疑似01群霍乱弧菌”。除细菌标本外，螺旋体由于不易着色并有形态特征，故多用不染色标本作暗视野显微镜检查。

8、1.细菌染色标本的检查细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的鉴定中应用最广,具有非常重要的作用。5.1常用染料用于细菌染色的染料，多为人工合成的含苯环的有机化合物，在其苯环上带有色基与助色基。带有色基的苯环化合物为一色原，虽然本身带色,但与被染物无亲和力而不能使之着色，助色基并不显色，但它木身能解离,解离后的染料可以