黄芪多糖提取条件研究

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1、黄罠多糖提取条件研究黄罠中多糖提取条件的研究黄^(RadixAstragalus)是豆科植物，黄茂的干燥根中含多糖、皂昔、黄酮、氨基酸及多种微量元素等有效成分,其中黄罠多糖(Astragaluspolysaeeharides,APs)是含量最多的-•种•其主要生物活性表现为增强免疫功能、脾脏增人、抗流感、抗肿瘤、防衰老及抗辐射，対心急梗塞冇改善心肌收缩性能、缩小梗塞面积、减轻心肌损伤等作用.曲于黄茂多糖的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药捉取及中草药现代化研究的焦点2—。近二I•年來，报道了多种提取多糖的方法，主要包

2、括水煮醇沉法、超声波捉取法、超虑法等。一般采取水煮醇沉法，因该法工艺简单、操作方便•但一般的水煮醉沉法水煮温度都在ioo°c进行.这样的工艺至少存在两大缺点一是水煮温度高，对提取物的选择性不好.对把黄蔑中的黄酮、皂贰等同时提取出來;黄酮及其类似物的化学式中含有酚经基，在空气中易被氧化而变色，这样対产品的纯度及颜色都冇很大的影响.二是水煮温度高，浪费能源和资源,经济效益低.由于提収温度高，使黄酮、皂贰类等也被提取出來，在后续工艺屮又不能把它们分离出來，造成产品不纯和资源浪费。1.1实验主要仪器紫外分光光度计、旋转蒸发仪、水浴锅、1.2试剂

3、及材料黄罠T燥根、酒耕、苯酚、浓硫酸、超萄糖、Q—蔡酚、2萸英多糖的提取将黄英根短杆(或黄茂根粉末)加人到5〜8倍量蒸馆水中，在适当温度下浸取广3h.过滤得提取液，滤渣可进行二次提取并留作进一步提取黄酮、皂贰等其它成分.将提取液冷致室温或更低温度后，以适当的速度在搅扌半下倾人2倍体积的95%酒精中，黄茂多糖沉淀出来.离心分离，得黄茂多搪，用95%酒精洗涤，然后干燥.这样得到的黄蔑多糖称为NGF(粗多糖),称重，与药材用量相比,得收率［1］。3黄罠多糖的分析3.1特征反应将约0.2g沉淀提纯物溶解在约20mL水屮，得无色溶液，浓度约为1%

4、.在试管中加人约1mL此溶液，再加人约0.5mL15%a—奈酚的酒精溶液,混合后，沿试管壁加人约lmL浓硫酸，此时在二者交界处即出现紫色环.混匀后，混介液呈蓝色.此反应为糖类包括单糖、寡糖和多糖的共同反应，称为Molisch反应•其反应机理可能是由于糖先转为糠醛或其衍生物,再与酚缩合并经氧化而产生有色物质.3.2标准曲线的绘制用苯酚-硫酸法，以窗萄糖为对照品，在490nm处测定吸光度，以吸光度Y为纵坐标，浓度X（ug/ml）为横坐标,绘制标准曲线准确吸取葡萄糖标准溶液0.CO.6ml共6份，分别置丁25ml容量瓶中，加蒸僻水补充至2ml

5、,再加入5%苯酚溶液lml,摇匀，迅速滴加浓硫酸5ml,摇匀，放置5min,置80°C水浴中加热15min,取出，迅速冷却至室温,另以2ml蒸馆水同上平衡操作作为空门对照，在490nm波长处测定吸光度，并求岀冋归方程[3]Y二...X+..・.3.3温度对提取率的影响精确称取5份黄罠粉，每份5g,置于鬪底烧瓶中，加入等量的去离子水，水浴加热，不断搅拌，加热温度分别为20,40,60,80,100°C,提取lh后取出，抽滤。取一定量滤液，定容，测定多糖含量，计算提取率，黄罠多糖的提取率随温度的上升而增加，当温度超过60°C,提取率随温度变

6、化增加显著，当温度到10（TC吋，提取率为最高[2]。而温度过高，不利于操作，如果规模化生产，则需耍考虑能量消耗及设备投资等因素因此，捉取多糖的温度不宜超过100°C。3.4提取时间对提取率的影响精确称量5g黄罠粉5份，水浴加热（以1中的最适温度，如80°C）,分别回流提取0.5,1,1.5,2,2.5h抽滤，取滤液，测定多糖含量。提取时间对提取率的影响口J知，随着提取时间的延长，多糖提取率增大当提取时间为Xh时，提取率为X,提取时间为X时，多糖提取率达到X,之J5随着提取时间的延长，提取率逐渐降低。因此，提取时间选为Xh宜。[1]3.

7、5料液比対提取率的影响精确称量5g黄罠粉4份，水浴加热（以1和2中的最适温度和提取时间，如80°C、2h）,分别以料液比1:4、1:6、1:8、1:10提取，抽滤、取滤液，测定多糖含量。料液比对提取率的影响可知，随着料液比的增加，多糖提取率增犬当提料液比为X时，提取率为X,当料液比为X时，多糖提取率达到X,Z后随着料液比的延长，提取率逐渐降低。因此，料液比选为X宜。4：黄英多糖提取条件的优化采川水煮法设计三因素三水平（见表）正交实验对黄罠多糖的提取条件进行优选，三因素三水平的选择是：料液比（如1：6,1:&1：10）,提取温度（如60°

8、C,80°C,100°C）,提取时

9、'可（如1,1.5,2h）称取黄罠粗粉5.0g,分别装在9个磨口三角瓶屮，按表1正交设计方案浸提、抽滤，滤液用去离子水定容至250mL;分别吸取2讥上述定容的溶液于100