实验五+酵母核酸的制备及成份鉴定

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1、实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定(先打开水浴锅,温度设置成100摄氏度)一、目的二、原理三、器材四、试剂和材料五、操作六、注意事项一、目的了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法了解苔黑酚定量测定RNA的方法。二、原理酵母核糖核酸中RNA含量较多，RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，即得到RNA的粗制品。核糖核酸中含有核糖、嘌蛉碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。三、器材锥形瓶大研钵电子天平离心机恒温水浴锅注意仪器使

2、用方法离心管平衡!!四、试剂和材料酵母粉0.04MNaOH,95%乙醇,1.5MH2SO4溶液,浓氨水,0.1MAgNO3酸性乙醇溶液：30ml95%乙醇加0.3ml浓盐酸混匀。苔黑酚--FeCl3溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓HCl中,再加入100mgFeCl3.6H2O，临用时配制。定磷试剂：按顺序以A：B：C：蒸馏水＝1：1：1：2（V/V）混匀,现配。A、17%H2SO4：将17ml浓硫酸缓缓加入83ml水中。B、2.5%（NH4）6Mo7O24：2.5g（NH4）4Mo2O7溶于1

3、00ml蒸馏水中。C、10%Vc：10gVc溶于100ml蒸馏水中，用棕色瓶贮存。颜色呈淡黄色时可以使用，如呈深黄或棕色则失效。五、操作1、酵母RNA的提取(2-3人一份)将4g酵母溶于20ml0.04MNaOH溶液中（先以少量NaOH溶液湿润酵母，并充分研磨)，将悬浮液转移到250ml锥形瓶中，在沸水浴30分钟，不时搅拌,冷却后转入离心管进行离心.----（蛋白质变性沉淀，RNA溶于碱性溶液）离心10min（4000rpm),将上清液倾入10ml酸性乙醇溶液中，待核糖核酸沉淀完全后，离心3min（4

4、000rpm），弃去上清。---RNA不溶于乙醇，pI=2.5）用95%乙醇洗涤沉淀，离心3min（4000rpm）弃去上清液，共进行两次。沉淀可在空气中干燥，即为酵母RNA的粗制品。五、操作2、RNA水解液的制备：取200mg提取的核酸，加入1.5MH2SO410ml，在沸水浴中加热10分钟后制成水解液并进行组分的鉴定。3、RNA组分的鉴定：①嘌呤碱：取水解液1ml加入过量的浓氨水，然后加入约1ml　0.1MAgNO3溶液　观察溶液的变化。②核糖：取1支试管加入水解液1ml，加苔黑酚--FeCl3溶

5、液１ml，放沸水浴中10分钟，注意溶液颜色的变化。③磷酸：取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml，在水浴中加热，观察溶液颜色的变化。六、注意事项1.先以少量NaOH溶液湿润酵母，并进行充分研磨，再用剩余的NaOH溶液冲洗研钵一起转入离心管。提取时,注意每个步骤的目的和意义2.值日第五组3.完成实验报告