大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性研究

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1、大蒜新素及其衍生物对兔痒!W的体外杀嫡活性研究任方奎何小燕李逐波通讯作者：西南大学药学院,E-mail:zb63@163.com（西南大学药学院，重庆北昭•400716）來源：原作收稿：2009T1-21南宁兽药科技网I•.传时间：2009T2-1编辑:dongy人蒜新索是从人蒜〈Alliumsativum｝中提取的一种具冇很强刺激性的挥发性油状物质,其化学名称为二烯丙棊三硫瞇，该化介物可以人工介成山。大蒜新素具有很强的抗菌⑵、抗病毒⑶、抗肿瘤⑷、抗癌囚等多种药理活性。但人蒜新素在抗寄生虫方而的报道很少，LunZR等⑹曾

2、报道大蒜新素可以治疗贾笫虫病和有溶组织内阿米巴〈Entamoebahistolytica｝和滴虫性阴道炎（Me力臼svaginalis｝等疾病。目前为止，大蒜新素及其衍牛物对兔痒酯的研究还未见报道。本文主要研究大蒜新素及其衍生物对兔痒嫡的体外杀嫡活性，测定半数致死时I'可（LTQ和半数致死浓度（ICQ,并对大蒜新素及其衍生物的构效关系进行了初步探讨。1试验材料1.1供试动物自然感染嫦病的家兔6只，雌雄兼冇，平均体重2.0±0.5kg。由重庆市北昭•区某兔场提供。1.2仪器与试剂倒置显微镜，20孔细胞培养板，挑虫针，大蒜新

3、素（南通鑫利化工有限公司，批号：XY070705）,二丁烯三硫瞇、二戊烯三硫酬和二己烯三硫瞇均有本实验室合成⑺，伊维菌素（河北威远动物药业冇限公司），硫软膏（成都明LI制药冇限公司）。2方法2.1药品配制精密称取1.0g大蒜新素及其衍生物于10讥的容量瓶内，力

4、[0,ImL吐温-80用水定容至刻度，混匀，即得100mg/mL的储备药液，4°C冰箱中保存备用。精密称取0.25g的阿维菌素于10汕的容量瓶内，力NO.ImL的吐温-80,用水定容至刻度，混匀，即得浓度为25mg/mL的阿维菌素,作为阳性对照液。取0.ImL的吐

5、温-80于lOniL的容量瓶内用水立容，作为阴性对照液。2.2离体杀嫡试验⑻⑼1.2.1痒媾的采集用小银子剥取口然感染哺虫病家兔的耳道痂皮及脓血置平皿内，平皿边缘涂少屋的硫软膏。置3CTC温箱内保存30min使虫爬出，借助放大镜，用挑虫针挑取嫡虫，在显微镜下对兔痒娴的形态学进行观察⑭，鉴定为兔痒嫡。2.2.2杀媾活性的测定将试验分为药物组、阳性对照组和阴性对照组。跖物组：在20孔细胞培养板的每孔各加入lOOmg/mL供试药物0.2mLo阳性对照组:20孔细胞培养板每孔各加入lOmg/mL的阿维菌素0.2mLo阴性对照组：

6、在培养板的每个孔中加0.2mL的阴性对照液。每组设置3个重复。每孔放置痒嫡10只，在10X40倍显微镜下观察，分别记录嫡的死亡时间。判定标准：虫体淋巴液流动，虫体不动但刺激有反应或长时间微弱颤动为麻醉；虫体淋巴液静止，虫体完全不动,刺激无反应，判定为死亡。2.2.3半数致死时间（LTG的测定将大蒜新素及其衍生物的储备液用水稀释成浓度为20mg/mL,挑取10只嫡虫置于20孔的细胞培养板屮，每个孔加0.加L药物，设置3个重复，同时以阴性对照液为阴性对照。给药后用显微镜观察，直至所有痒哺死亡，记录每个时段的死亡情况。2.2.

7、4半数致死浓度（LCG的测定将大蒜新素及其衍牛物储备液先水稀释成4mg/mL，再倍比稀释成2.Omg/mL、1.Omg/mL>0.5mg/mL、0.25mg/mL和0.125mg/mL5个不同浓度,每个浓度设置3个重复，同时以阴性对照液为阴性对照。在培养板的试验孔中各加0.2讥不同浓度的药物，每孔挑入10只嚇虫。将培养板放入测试环境（25°C,相对湿度为75%）,24hJn镜检死亡情况。2.3统计分析根据机率值分析法，用Excel的卡方检验运算程序口动判断毒力回归方程的适合性与否吧计n.T.LTso和LG。。用SPSS1

8、2.0软件对试验数据进行多因素方差分析。3结果与分析3.1杀嫡活性从表1中可以看出，100mg/mL的大蒜新素5min开始出现哺虫死亡，13min全部死亡，25mg/mL的阿维菌素5min开始出现輛虫死亡，17min輛虫全部死亡，町见lOOmg/mL的大蒜新素与25mg/mL的阿维菌素的杀则活性差异显著（P〈0.05）。从表1中可以看出，相同浓度下的大蒜新素衍生物的完全杀死嫡虫所需要的时问t于人蒜新索，大蒜新素与二丁烯三硫瞇，二己烯三硫瞇之间的差异显著（P<0.05）,与二戊烯三硫瞇的差异不显箸（1）>0.05）。二丁烯

9、三硫瞇、二戊烯三硫讎与阿维菌素的差异不显著（P>0.05）,与二己烯三硫瞇的差异极显著（P<0.01）o大蒜新素衍生物之间的差界显著（P<0.05）o可见，lOOmg/皿大蒜新素与25mg/mL的阿维菌素杀嫡活性和当，从图3中町以看出随着链的延长大蒜新素及其衍生物的杀嫦时间呈现“N”规律变化。表1大蒜新素及其衍生物对