灰莉的杀螨活性研究

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1、灰莉的杀螨活性研究AstudyonacaricidalactivityofFagraeaceilanicaThunb专业名称：生物化学与分子生物学申请人：高丽梅指导教师：邓业成教授论文答辩委员会主席：委灰莉的杀螨活性研究研究生：高丽梅年级：2011导师：邓业成(教授、博士)专业：生物化学与分子生物学研究方向：酶与蛋白质化学摘要本文以采自广西桂林的灰莉(FagraeaceHanicaThunb．)作为研究对象，用有机溶剂冷浸提取法提取植物成分，采用浸叶法和喷雾法测定灰莉植株不同部位提取物对柑橘红蜘蛛的触杀毒力，确定其杀螨活性部位。进一步对活性部

2、位提取物采用液一液萃取、硅胶柱层析等分离纯化技术，将杀螨活性物质分离纯化，并用波谱分析技术鉴定杀螨活性成分的结构。研究了杀螨活性物质对柑橘红蜘蛛的生物活性，以及对柑橘红蜘蛛雌成螨体内蛋白质含量、2种解毒酶和3种保护酶活性的影响，初步探究了活性物质的杀螨作用机理。采用浸叶法和喷雾法分别测定了灰莉枝条、叶片甲醇提取物对柑橘红蜘蛛雌成螨的触杀毒力。结果表明，浸叶法测定的致死中浓度(LC加)分别为3．4298g／L和4．9236g／L，喷雾法测定的LC加分别为3．9682g／L和5．5334g／L，2种测定方法结果显示2种甲醇粗提物具有较好的杀螨活性

3、。用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水分别将这2个粗提物进行萃取，并测定了8个萃取层的杀螨活性，结果显示灰莉枝条石油醚层、灰莉叶水层的杀螨活性较好，浓度为2．59／L时，浸叶法测定这2个活性萃取层对柑橘红蜘蛛雌成螨48h校正死亡率分别为92．11％和94．33％，喷雾法测定的校正死亡率分别为85．11％和90．8％。喷雾法测定2个活性萃取层对柑橘红蜘蛛雌成螨的LC。。分别为1．73729／L和3．29709／L。2个活性萃取层对柑橘红蜘蛛雌成螨还有驱避活性和产卵忌避活性，最高驱避率为80．95％，最高产卵忌避率为95．45％。将2个活性萃取层分别用

4、硅胶柱层析和薄层层析(TLC)进行分离纯化，结合活性跟踪，从中分离获得1个活性化合物。经核磁共振(NMR)数据分析，初步鉴定为四环三萜类物质。该活性化合物对柑橘红蜘蛛雌成螨、若螨、幼螨和卵的触杀LC。。分别为1．5742g／L、1．9888g／L、1．4493g／L和2．4618g／L，浓度为2g／L时，对雌成螨的产卵忌避率为95．34％。初步探究了狄莉杀螨活性物质的作用机理。对柑橘红蜘蛛雌成螨进行触杀处理后，体壁外观发生了变化：体表失水、螨体皱缩、虫体发黑。灰莉提取物处理虫体，虫体内蛋白质含量先下降后上升。灰莉提取物抑制柑橘红蜘蛛螨体内乙酰

5、胆碱酯酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性，增强过氧化氢酶(CAT)活性，对谷肤甘肤S一转移酶表现出先升后降的趋势，表明乙酰胆碱酯酶、超氧化物歧化酶(SoD)、过氧化物酶(POD)可能是灰莉杀螨活性物质的作用靶标，同时氧化应激反应也与其杀螨作用机制有关。关键词：狄莉；柑橘红蜘蛛：杀螨活性；活性物质；作用机理AstudyonacaricidalactivityofFagraeaceilanicaThunbMasterCandidate：LimeiGaoGrade：201Supervior：professor＆DoctorYec

6、hengDengMajor：BiochemistryandmolecularbiologyResearchDirection：EnzymeandProteinChemistryAbstractInthisthesis．soastodeterminetheacaricidalpartsofFagraeaceilanicaThunb，plantscollectedfromGuangxiGuilinwereusedastheresearchobjects，theactiveingredientswereextractedbyorganicsolve

7、ntextractionmethod，theinsecticidalactivitiesofdifferentpartsofFagraeaceilanicaThunb’SextractstoPanonychuscitriMcGregorweredeterminedbyleaf-residuemethodandSpraymethodinlaboratory·Andthentoseparateandpurifytheactivecomponents，liquid-liquidextraction，silicagelcolumnchromatogr

8、aphyandmoreotherseparateandpurifytechniqueswereused．Thechemicalstructureofactiveco