基因工程的工具——酶与载体 (2)

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1、1.1.2《基因工程的工具--酶与载体》学案1.知识回顾DNA的基本组成单位是，它包含3部分分别是、、。相邻的脱氧核苷酸通过连接，形成脱氧核苷酸链。2.导学问题思考1：限制酶怎样在蜘蛛DNA中“找到”蛛丝蛋白基因并剪切下来呢？--请阅读P10第二段什么叫回文序列？思考2：限制酶剪切的是DNA的哪个位置呢？思考3：请总结限制酶有哪些作用？思考4：剪切下来的蛛丝蛋白基因，是不是就可以直接导入山羊的细胞中了呢？--请阅读P12第一段思考5：请认真观察图1-8，质粒有哪些基本结构？各有什么作用？思考6：用限制

2、酶切割得到的蛛丝蛋白基因和切开的质粒要怎么连接起来呢？3.思考7：请说说在剪切和拼接不同DNA片段的过程中，有什么体会？4.填写思维导图34.疑难解析----比较有关的酶（1）DNA水解酶：能够将DNA水解成4种脱氧核苷酸。（2）解旋酶：作用的部位是氢键,结果是DNA双螺旋打开，形成DNA单链。（3）DNA聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成DNA长链，用于DNA分子的合成。（4）DNA连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链DNA片段的缺口，用于基因表达载体的构建。（5）限制酶：使双链DNA分子的特

3、定部位的磷酸二酯键断开，用于提取目的基因和切割载体。5.例题巩固：1．依右图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是A．切断a处的酶为限制核酸性内切酶B．连接a处的酶为DNA连接酶C．切断b处的酶为解旋酶D．切断b处的为限制性内切酶2.下列关于质粒的叙述，正确的是　　　　　　　　　　（　　）A、质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B、质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状DNA分子C、质粒只有在导入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制[来源:学科网]D、细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进

4、行的3．科学家常选用的细菌质粒往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是A．提高受体细胞在自然环境中的耐热性B．有利于检测目的基因否导入受体细胞C．增加质粒分子的相对分子质量D．便于与外源基因连接4．在DNA测序工作中，需要将某些限制性内切核酸酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA分子中的物理参照点。这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。假设有以下一项实验：用限制酶HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电

5、场的作用下，降解产物分开，如下图所示。据此分析，这两种限制性内切核酸酶在该DNA分子上的限制位点数目是以下哪一组？A．HindⅢ1个，BamHⅠ2个B．HindⅢ2个，BamHⅠ3个C．HindⅢ2个，BamHⅠ1个D．HindⅢ和BamHⅠ各有2个5．限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补

6、序列为何？3A.BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT—B.BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC—C.EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT—D.BamHI和BglII；末端互补序列—GATC—6.两个核酸片段在适宜的条件下，经X酶的作用，发生下述变化，则X酶是A.DNA连接酶B.RNA聚合酶C.DNA聚合酶D.限制酶7．（1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个

7、酶Ⅱ的切点。①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性未端。___________________________[来源:Z,xx,k.Com]②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后形成的黏性未端。_____________________③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性未端能否连接起来？为什么？________________________________________________________答案1-6DBDBDA7．分析：本题主要考察黏性末端的知识。解答本题的关键

8、是理解限制酶的特点。在切割目的基因和运载体时，一定要使用同一种限制性内切酶，这样，切出的切口才一样，才能进行碱基互补配对连接起来。两个黏性末端只要一样就可以进行碱基互补配对，再通过DNA连接酶连接起来。答案：（1）[来源:学#科#网Z#X#X#K] ③可以连接。因为由两种限制性内切酶切割后所形成的黏性末端是相同的（或“是可以互补的”）。[来源:学科网ZXXK]3