资源描述：
《端粒酶活性在卵巢肿瘤组织中表达的临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、端粒酶活性在卵巢肿瘤组织中表达的临床意义西北国防医学杂志2000年第21卷第4期杨秀芝陈必良苏明权辛晓燕王德堂摘要：目的：研究测定端粒酶活性在诊断和预测卵巢肿瘤方面的意义。方法：应用PCR-TRAP法检测30例卵巢肿瘤组织(良性组织8例，交界性或低度恶性肿瘤7例恶性肿瘤15例)的端粒酶活性。结果：8例卵巢良性组织中均未测出端粒酶活性,7例卵巢交界性或低度恶性肿瘤组织中,4例(57%)端粒酶活性阳性表达，15例卵巢恶性肿瘤组织中,14例(93.3%)端粒酶活性阳性表达。卵巢上皮性恶性肿瘤组织中，在组织类型、组织学分级及肿瘤分期Z
2、间无显著性差异。结论：端粒酶活性的检测不仅有助于卵巢肿瘤的诊断和鉴别诊断，且有助于预测患者的预后。关键词：卵巢肿瘤；端粒酶活性；表达无限增殖是癌细胞的重要生物学特性。研究发现端粒臨与细胞分裂及寿命控制有密切关系，在细胞癌变早期由于端粒酶的活性增强，致使端粒的长度得以维持，细胞染色体形态得到稳定，从而逃避了因端粒缩短而引起的细胞死亡，使细胞获得永生化［1］。端粒酶活性在人体多数肿瘤纽织中均获检出。我们采用端粒重复扩增PCR(PCR-TRAP)方法对我院30例卵巢肿瘤组织进行端粒酶活性检测，了解端粒酶活性在卵巢肿瘤组织中的表达及在
3、诊断和预测卵巢肿瘤预后方而的意义。1材料和方法1.1材料1.I.1组织标本來源：30例卵巢肿瘤组织均为我院1999-03〜09手术切除标本，包括8例卵巢良性肿瘤，7例交界性肿瘤，15例恶性肿瘤。所有病例均经病理学证实。获取的新鲜组织标木立即置一20°C冻存。1.1.2端粒酶检测试剂：由Oncor公司提供。1.2方法1.2.1端粒酶的提取：手术切除的卵巢肿瘤组织5()mg,置液氮速冻后用组织研磨器研成粉末，PBS缓冲液洗涤一次，10000g・min-l离心1min,弃洗液，加入100u1预冷的裂解液(10mmol•L—1tris
4、—HCLpH7.5;lmmol•L~1EGTA；lmmol•L—1二蔬基乙醇：0.5%CHAPS；10%廿油5),混合后冰浴裂解30min,12000g-min一14°C离心20min,上清即为端粒酶提取物，或一20°C保存备川。1.2.2PCR扩增：PCR反应总体积为50U1,包括10XTRAP反应液5.0u1,2.5mmol•L-1dNTPsmix1.0u1,Ts引物1.0u1,TaqdNA聚合酶2U,端粒酶提取物2.0u1,无菌石蜡油30Pl,离心片刻，置30°C反应30min后，加CX引物1.0U1,进入PCR循环，循
5、坏条件为：94°C3min-*94°C30s-*48°C30s->72°C30s,35次循坏，最后72°C延伸5mine1.2.3产物的检测：取PCR扩增产物15u1,于10%非变性聚丙烯酰胺凝胶200V电泳90min,将凝胶小心取出置T*0.1Pg・ml—1的EB液中染色15min,再用蒸锚水漂洗两次，紫外灯下观察结果并拍照。反应以TSR8阳性模板为阳性对照，含36bp的内对照(Oncor公司),IXCHAPS裂解液代替组织裂解液为空白対照，每一样品均设立端粒酶热失活对照(PCr-TRAP反应前将细胞裂解物于85°C处理15
6、min,使端粒酶失活)。1.2.4统计学处理：采川x2检验进行统计学处理。2结果2.1卵巢肿瘤纽织中端粒酶活性的表达：8例卵巢良性肿瘤组织中：包括卵巢粘液性囊腺瘤2例，卵巢浆液性囊腺瘤2例，卵巢血管平滑肌瘤2例，卵巢子宫内膜异位囊肿2例，端粒酶活性均呈阴性。在7例交界性或低度恶性卵巢肿瘤组织中，包括2例交界性粘液性囊腺瘤，2例交界性浆液性囊腺瘤，2例支持细胞瘤，1例粒层细胞卵泡膜细胞瘤，4例端粒酶阳性表达，3例端粒酶为阴性。在15例卵巢恶性肿瘤组织屮，包括卵巢浆液性愛腺癌6例，粘液性囊腺癌2例，子宫内膜样癌4例，恶性畸胎瘤1例
7、，转移性癌2例，14例端粒酶活性阳性表达，1例端粒酶活性为阴性。结果见表1。衣1卵巢肿瘤组织中端粒酚活性表达肿瘤例数阳性例数阴性例数阳性率(％)良性8080交界性74357.0恶性1514193.3注：comparedtobenign:P<0.051.2端粒酶活性与肿瘤组织学的关系：虽然我们的方法是端粒酶活性的定性检测，但发现卵巢恶性肿瘤的端粒酶活性与肿瘤的组织类型、组织分级、肿瘤分期无明显的相关性。3讨论向1994年Kim［2］建立了高效敏感的以PCR为基础的端粒重复扩增(TRAP)方法以來,端粒酶引起了人们的广泛关注。近年
8、文献报道，绝大部分肿瘤呈端粒臨酶阳性，而在邻近止常人体组织细胞或良性肿瘤则为阴性［3］,在恶性肿瘤针吸标本、尿液、肠道冲洗液屮，端粒酶活性的检测也有较高的表达，有助于肿瘤的早期诊断［4］。Hiyama等［5］对乳腺癌、胃癌病人的研究发现，端粒酶阳性者肿瘤体积人，淋巴结转移率高
