广西地方标准《猪蓝耳病病毒美洲型野毒株和疫苗株的鉴别检测多重荧光定量反转录聚合.

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1、广西地方标准《PRRSV美洲型野毒株和疫苗株的鉴别检测多重荧光定量RT-PCR法》编制说明一、项目背景.来源及目的1、项目背景猪蓝耳病病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)可以引起以母猪繁殖障碍及各种年龄猪特别是仔猪呼吸道疾病为主要特征的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)o该病最早于1987年在美国发生,现已呈世界性分布。我国1996年首次分离到PRRSV美洲型经典株，2006年分离到美洲型高致病性变异株(HP-PRRSV)oPRRS是我国猪群中最重要的传染病之一，给我国养猪业造成

2、了巨大的经济损失。目前，广西防控PRRS的主要措施之一就是接种TJM-F92株弱毒活疫苗。但由于PRRSV美洲型变异株和PRRSV美洲型经典株同时流行，加上临床使用的TJM-F92弱毒疫苗株，给临床发病猪体内的PRRSV野毒株和疫苗株的鉴别检测及快速诊断带来很大困难。此前，我们建立了同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的多重RT-PCR方法。而应用多重荧光定量RT-PCR法同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的方法尚未归纳总结形成国家、农业行业或地方标准。2014年以来，我单位在完成广西科技成果转化与推广计划项目《髙致病性猪蓝耳病

3、快速诊断及免疫防控技术应用示范》(编号：桂科转14125004-22,主持人：施开创)的过程中，根据我区重大动物疫病监测、检测的需要，建立了检测PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的多重荧光定量RT-PCR法，并用于临床检测，效果显著。该方法经实验室验证及临床反复应用，证明具有快速、准确、特异、敏感、高通量、无污染等优点，可以用于临床样品的检测。2、项目来源本地方标准为自治区质量技术监督局下达给广西壮族自治区动物疫病预防控制中心承担的2015年第二批广西地方标准制定(修订)计划项目(桂质监函[2015]183号)，编号2015-0256o3、项目目

4、的目前用于检测PRRSV的方法主要有病毒分离、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)、免疫荧光试验(IFA).RT-PCR和荧光定量RT-PCR等。但能够同时检测和区分PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的多重荧光定量RT-PCR迄今尚无国家、农业行业或地方标准，因此，制定一个同时检测并区分这三种毒株的地方标准十分必要。本项目制定了检测PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的多重荧光定量RT-PCR法的推荐性地方标准，内容涵盖应用多重荧光定量RT-PCR法检测这三种毒株的材料准备、操作方法及结果判定等。二.工作概况从2014年1月开始，我单位承担了

5、广西农业科技成果转化项目《高致病性猪蓝耳病快速诊断及免疫防控技术应用示范》。课题组在PRRSV的快速鉴别检测方法上开展了大量研究工作，取得较好成果。鉴于国内没有检测PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株的多重荧光定量RT-PCR法的国家、农业行业及地方标准，课题组开展了相关资料的收集整理工作，确定标准编写冃标和依据，同时起草制订广西地方标准项冃建议书，积极开展标准的申报。2015年5月接到自治区质量技术监督局下达的地方标准制定（修订）项目计划的通知后，迅速成立标准编制课题组，确定标准起草编写方案及时间进度表，并积极组织实施。至2015年7月31FI已

6、完成标准初稿的编写。本标准编制课题组人员包括：施开创、莫胜兰、韦建华、屈素洁、王海清、邹联斌、蒙振亩、粟艳琼、李军。具体分工如下：施开创：组长。负责标准的提出、起草、审定。莫胜兰：负责标准的起草、审核。韦建华：负责标准的实验室及临床验证。屈素洁：负责标准方法的建立、验证。邹联斌：负责标准的起草、校正、外联。王海清：负责标准的实验家及临床验证。蒙振亩：负责标准的实验室及临床验证。粟艳琼：负责标准的实验室及临床验证。李军：负责组织标准的校正、审定。三、标准编制原则1、政策性原则：本标准编写过程遵循国家相关法律、法规和国家标准。2、先进性原则：以国内外相关

7、文献资料为参考，力求反映最新的科技成果；以国内同类标准的编写方法为基础，对本标准进行规范、充实和创新，使之具有先进性。3、经济性原则：本标准编制过程，从获取信息、起草、实验室试验和临床验证到形成征求意见稿的每一个环节，在确保质量的前提下均力行节约，利用有限的经费圆满完成各阶段编写任务。4、适用性原则：木标准借鉴国内外PRRSV荧光定量RT-PCR法检测技术的成功经验，并经实验室和临床验证，完全按照要求编写，内容全面,形式规范，可操作性和实用性强。5、协调统一性原则：本标准参照国内相关标准的编写形式和表达方法,力求与国内相关标准协调统一。本标准通过持续

8、查新，确保内容不与已有的国家、农业行业和地方标准相重复或矛盾。6、规范化原则：本标准是严格按照GB/T1.1