资源描述：
《发酵工艺实验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验一柠檬酸发酵1、实验目的了解柠檬酸发酵原理及过程，掌握柠檬酸深层液体发酵及中间分析方法。2.实验原理黑曲霉发酵法生产柠檬酸的代谢途径被认为是：黑曲霉生长繁殖时产生的淀粉酶、糖化酶首先将淀粉转变为葡萄糖；葡萄糖经过酵解途径（EMP）和HMP途径转变为丙酮酸;丙酮酸由丙酮酸氧化酶氧化牛成乙酸和C02,继而经乙酰磷酸形成乙酰辅酶A,然后在柠檬酸合成酶（柠檬酸缩合酶）的作用下生成柠檬酸。黑曲霉在限制氮源和锚等金属离子下，同时在高浓度葡萄糖和充分供氧的条件下，TCA循环中的a■酮戊二酸脱氢酶受阻遏，TCA循环变成“马蹄形”，代谢流汇集于柠檬酸处，使柠檬酸大量积累并排出菌体
2、外。其理论反应式为C6H!206+1.502-C6H8O74-2H2O柠檬酸理论得率为106.7%;若以含一个结晶水的柠檬酸计为116.7%o3、实验装:⑴实验装置与材料：A、实验装置：旋转式摇床、恒温培养箱、高速离心机（4000・6500r/min）。B、菌种:黑曲霉柠檬酸生产菌株Co8-27oC、材料：获皮，马铃薯，薯干淀粉，蔗糖，玉米粉，大麦芽，大米，琼脂，淀粉酶（中温酶与高温酶）。D、器皿:15mL试管，100mL三角瓶，2000mL烧杯,500mL三角瓶，离心管若干。E、试剂:0.1429mol/LNaOH,1%酚猷试剂，费林甲，乙溶液，0.01%标准葡萄
3、糖溶液。（II）实验流程：保藏菌株一活化菌株（斜面培养）->200mL三角瓶鉄曲培养->500-1000mL三角瓶液体发酵。（III）斜面培养基：马铃薯琼脂培养基：去皮马铃薯200g切成小块，加水约500mL,煮沸30min,然后用纱布过滤，滤液加蔗糖20g,琼脂20g,溶化后自來水定容至lOOOmL,分装于经干热灭菌后的带棉塞试管内，121C灭菌20min,取出摆成斜而备用。摇瓶发酵培养基：取细度为40目以上的淀粉6〜8g,装入500mL三角瓶中，再加入物40mL水和5个单位淀粉酶（中温）/g淀粉，于75-80^下液化15min0瓶口塞入8层纱布包扎好，于110C
4、灭菌15〜20min,冷却备用。取细度为60目以上的玉米粉300g装入2000mL烧杯中，加入lOOOmL水和7-8个单位淀粉酶（高温）伦玉米粉,8（TC液化10min后，继续加热至90C保温30min,碘检不变色后，再加热到100°C煮沸（5〜10min）,趁热经过二层纱布过滤，加水冷却并调整糖度至15%~20%和蛋白质含量不超过4g/L,取过滤液40mL分别装入500mL三角瓶中，瓶口塞入8层纱布包扎好，于12TC灭菌15-20min冷却备用。4、实验步骤及方法（1）种子制备：（A）斜面种子制备：用接种环挑取冰箱保存的斜面菌种于斜面培养基上，于35-C恒温箱中培
5、养3〜5d,待长满大量砲子后，即内活化的斜面种子。（B）砲子悬浮液的制备：用无菌移液管吸取5mL无菌水至黑曲霉斜面上，用接种环轻轻刮下孑包子，装入含有玻璃球的三角瓶，盖好塞子振荡数分钟。每支斜面的也子悬浮液可接2~3瓶裁曲三角瓶。（2）摇瓶发酵培养：将荻曲孑包子（或直接将斜面种子）于上述薯干粉或玉米粉的摇瓶发酵培养基屮。接种量：一支斜面接4〜5瓶，一瓶联曲抱子接20-35瓶。500mL三角瓶装液40mL,于转速为200r/min（24h前为100r/min,24h后为200r/min）＞300r/min（24h前为100r/min,24h后为300r/min）旋转摇
6、床上,35°C下培养3-4do（3）发酵过程检测：（人）发酵0、24、48、72、96h分别各取下两瓶检测残糖、柠檬酸含量，以观察发酵过程中黑曲霉的耗糖与柠檬酸生成速率。反应条件:24h前为100i7min,24h后为200r/mino（B）柠檬酸含量检测:一般检测发酵过程中的总酸，采用0.1429mol/LNaOH溶液滴定发酵过滤清液。（C）总糖及残糖（还原糖）测定:采用费林试剂法。5、实验结果与记录表5黑曲霉柠檬酸摇瓶液体发酵发酵时间/h残糖/%柠檬酸（总酸）含量/%糖酸转化率/%0瓶1瓶224瓶1瓶248瓶1瓶272瓶1瓶2反应条件:24h前为100/min,
7、24h后为300r/min6、实验数据处理（1）平均耗糖速率（g/h）:单位时间内黑曲霉消耗糖（还糖）的克数。（2）平均柠檬酸牛成速率（g/h）:单位时间内黑曲霉牛成柠檬酸的克数。（3）糖酸转化率（％）:黑曲霉生成拧橡酸的克数与消耗（还原糖）的克数Z比的百分数。7、思考题（1）试以发酵时间为横坐标,以糖消耗量、柠檬酸生成糖酸转化率为纵坐标作图，说明三者随发酵时间的变化,并加以分析。实验二、抗生素发酵实验1＞实验目的通过添加抑制剂的方法,加深对抗生素代谢调控发酵的理解，掌握抗生素研究中常用的比色、纸层析等实验技术。2、实验原理四环素族抗菌素包括金霉素、四环素和土霉
