大学 生物化学实验 必看(2)

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1、实验二索氏抽提法测定粗脂肪含量一、实验目的了解索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量操作方法。测定脂肪的含量，可以作为鉴别样品品质优劣的一个指标。二、实验原理脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhletextractormethod）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的

2、抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料油料作物种子(花生)、中速滤纸.2．仪器（1）SZF-06A脂肪仪（2）不锈钢镊子（长20cm）（3）电子天平（4）烘箱3．试剂无水乙醚（A.R.）四、操作步骤1．准备1)将滤纸切成8cm×8cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。2)按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重（记作a）、

3、(称量时室内相对湿度必须低于70％)。2．包装和干燥将花生研碎,放入105±2℃的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷却至室温。称取约3g左右研细的样品放入上述已称重的滤纸包中装入，封好包口，按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）。3．抽提将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的50ml的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中。连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在70～80℃之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120～150滴/min或回流7次/h以上），抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约需6

4、～12h）。抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发（抽提室温以12～25℃为宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。4．称重待乙醚挥发之后，将滤纸包置于105±2℃烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）。五、结果与计算式中：a：称量瓶加滤纸包重（g）b：称量瓶加滤纸包和烘干样重（g）c：称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g）六、注意事项1、测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。这是因为：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可

5、饱和约2％的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。2、试样粗细度要适宜。试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。3、索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长，如能将样品先回流1～2次，然后浸泡在溶剂中过夜，次日再继续抽提，则可明显缩短抽提时间。六、注意事项4、YG-Ⅱ型油分测定器容量大，适合于样品较多的选种鉴定工作使用，温度控制在70℃左右，8h可提取完毕。5、必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中

6、不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。乙醚中过氧化物的检查方法是：取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。处理的方法是：将乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗涤2～3次，以除去乙醇；然后用盐酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振摇，静置，分层后弃去下层水溶液，以除去过氧化物；最后用水洗至中性，用无水CaCl2或无水Na2SO4脱水，并进行重蒸馏。七、思考题1．如何利用残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量？2．测定过程中为什么需要对样

7、品、抽提器、抽提用有机溶剂都要进行脱水处理？3．在实验过程中安全使用乙醚应注意哪些问题？4．测定样品粒子粗细有什么要求？