结直肠癌患者外周血CRD-BPRNA表达的探索性研究

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1、结直肠癌患者外周血CRD-BPRNA表达的探索性研究宁夏医学院附属医院尹莉宁夏回族自治区自然科学基金项目编号NZ0552研究背景大肠癌的发病现状全球结直肠癌每年发病新病例数达94万，每年近50万人死于结直肠癌。结直肠癌死亡居癌症死因第3位。结直肠癌在我国也是最常见的恶性肿瘤之一，目前居恶性肿瘤发病率第4位。近年来，结直肠癌的发病率呈明显上升趋势，此趋势在大中城市较明显。结直肠癌发病与生活方式的改变及膳食结构不合理密切相关。随着人们生活方式、饮食结构的改变、期望寿命的提高，大肠癌的发病率还将进一步提高。新发病数死亡数Lung&bron

2、chus-1.35millionBreast-1.15millionColon&rectum-1.02millionStomach-934,000Liver-626,000Lung&bronchus-1.18millionStomach-700,000Liver-598,000Colon&rectum–529,000Breast–411,000ParkinDM,CACancerJClin.2005Worldwide-2002研究背景研究背景TNM分期与结直肠癌存活率的关系StageTMN5yrSurvivalrates0，ⅠTis/

3、1N0M0>90%ⅠT1/2N0M085~90%ⅡA/BT3/4N0M070~75%ⅢAT1/2N1M77~91%ⅢBT3/4N1M054-63%ⅢCT4N2M026~37%ⅣAnyTAnyNM1<5%研究背景结直肠癌的初治诊断分期，Ⅰ期占15%，Ⅱ期占20～30%，Ⅲ期占30～40%，Ⅳ期占20～25%。根据2006年9月出版的《中国肿瘤临床年鉴》，2006年我国26所省级肿瘤医院共有140732人接受了肿瘤手术，住院病人共有375447人次，门诊病人314万人次。结直肠癌发病率持续上升结直肠癌早期诊断意义重大探索结直肠癌早期诊断

4、以及预后判断的指标研究背景预后发生c-myc基因研究背景结直肠癌发展不稳定编码区结合蛋白（CodingRegioninstabilityDeterminant-BindingProtein，CRD-BP）。1992年BersteinPL等国外学者发现CRD-BP。1997年Rossa基因定位(17号染色体的q21.3)。CRD-BP在c-myc基因中发现的第一个遮盖蛋白。CRD-BP受生长发育调节，正常情况下，CRD-BP只在胚胎组织中表达，在成体组织中表达被抑制.既往组织病理的研究发现，CRD-BP是一个癌胚蛋白,在乳腺癌、小细胞

5、肺癌、结直肠癌中表达或过表达，因此有可能成为新的特异肿瘤标志物。CRD-BPc-myc基因结直肠癌CRD-BPRNA研究意义CRD-BP与c-myc基因CRD区结合避免核酸内切酶对c-myc的降解,延长其半衰期本课题通过检测探讨CRD-BPRNA在结直肠癌、良性肠道疾病及正常人群外周血的表达情况，探讨其在结直肠癌早期诊断、判断预后的临床价值。研究意义材料和方法的饿123手术后经病理证实为结直肠癌患者实验组32例结直肠癌实验组纳入标准术前经结直肠镜初步诊断患者术前未经过治疗(放疗、化疗、内分泌等治疗)的饿123年龄36~83岁，平均6

6、2岁实验组32例实验组临床特征选取宁夏医学院附属医院2006年1月~2006年4月收治结直肠癌患者32例男18例，女14例的饿12实验组32例实验组临床特征DukesA期7例、DukesB期13人、DukesC期10人、DukesD期2人术后确定淋巴结转移12例，无淋巴结转移20例的饿12实验组32例实验组临床特征高分化腺癌9例、中分化腺癌16例、低分化腺7例术后确定肿块最大直径≤5cm18例、>5cm14例选取宁夏医学院附属医院2006年1月~2006年4月门诊就诊者，经肠镜活检确诊良性肠道疾病患者15例对照组（共35例）选取宁夏

7、医学院附属医院2006年1月~2006年4月门诊就诊者健康体检者20例对照组试验方法荧光定量巢式RT-PCR（FQ-nRT-PCR）实验操作步骤病例选择采集外周静脉血离心提取淋巴细胞RNA提取及定量：采用Trizol总RNA提取液提取细胞总RNA巢式荧光定量PCR结果样本总RNA的提取质量和纯度图中28s、18s二条清晰的条带和稍欠清晰的5s条带，说明提取的RNA样品纯度较高，完整性较好，无DNA污染，无降解。图1RNA提取结果定性检测结果M:DNAmarker0:RNAfragmentamplifiedfromsamples(ne

8、gative)1-10：CRD-BPRNAfragmentamplifiedfromsamples(positive)Inner图2结直肠癌外周血CRD-BPRNA检测阳性样本电泳图CRD-BPRNA阳性样本的动力曲线图3荧光定量PC