菌株鉴定方法研究进展【文献综述】

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1、毕业设计文献综述生物科学菌株鉴定方法研究进展[摘要]：本文主要综述了目前菌种鉴定中主要使用的常用鉴定方法，分析其各自原理及一些影响因素，并阐述各自的优缺点，并根据各自的应用范围和条件，选择合适的鉴定的方法。对于不同的菌株，采取的鉴定方法也会有很大的不同。[关键字]：菌株鉴定；鉴定方法；优缺点从菌株的分离到菌株的筛选再到鉴定，整个过程下来才能确定一株未知菌。而整个过程中的鉴定对确定菌株就显得极其重要了。细菌鉴定是指将分离培养获得的病原菌，通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度，继而进行系统鉴定。菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种

2、时，应在开启后经过两代的适应性培养方可进行复核性的系统鉴定。系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测，并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群)[1]。确定菌种不仅可以了解未知菌的特性，还可以丰富菌种库，为微生物这一领域做出贡献。而对于确定菌株仅仅依靠一种鉴定方法是远远不够的，必须结合几种方法才能准确的确定出未知菌的种。目前采用的菌株鉴定方法主要有：传统方法，仪器自动化鉴定,分子生物学方法。考虑到这三种方法的优缺点，现在大多数是将这三种方法结合起来进行菌株的鉴定，增加准确性。当然，三种

3、方法比较起来，分子生物学的方法是最为准确的。下面将这三种方法进行进一步的介绍分析。1传统方法传统方法就是直接对菌株的菌落特点进行观察和利用显微镜对菌株形态进行进一步的观察，同时对菌株进行一定的生理生化实验，来大致的确定菌株的属。1.1形态结构形态结构观察主要是用各种对应方式的染色方法如革兰氏染色、芽孢染色等对被染色的微生物形状、大小、排列方式、细胞结构及染色特性在显微镜下直接观察，以及微生物在平板上生长的菌落形态特点等因素，从而达到区别、鉴定微生物的目的[2]。同时细菌培养时要注意培养基的挑选，一些细菌的特殊结构如荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等

4、[3]，它们要在特定的培养基上才能表达正常生长发育。在镜检时观察细菌基本形态结构和大小及其排列状态、菌落的形状、有无形成芽孢等。因此据此可以对不同微生物加以区别鉴定。1.2生理生化实验微生物生理生化反应是用化学反应来测定微生物的代谢产物，生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生理生-4-化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。形态学鉴定辅加生化试验在细菌鉴定中具有重要的意义,生理生化试验是根据细菌培养过程中不同菌种所产生的新陈代谢产物各有不同,同样表现出不同的生长特性。通过生物化学的方法来检测这些物质的存在

5、与否,从而能够得到细菌的鉴定结果。如糖(醇)类代谢试验、v-p试验、吲哚试验、MR试验、硝酸盐还原等[4]。但是因为生理生化实验的局限性，用此法鉴定菌种，往往只能鉴定到属，不能明确到种，如GONZLEZCJ等[5]从淡水鱼及其生境中分离了249株益生菌并对其进行了形态学和生理生化特征进行了鉴定，其中92％以上的菌株被鉴定到属的水平[5]。WIJTZEST等利用2种碳源发酵测试体系也未能将14种益生菌分离株鉴定到种的水平[6]。对于一些益生菌而言表型形状的鉴定是很有用的，可以非常明确地鉴定其为那个种属的细菌，但是也有一些益生菌，虽然其表型性

6、状非常相似，但是这并不意味着他们基因型具有很近的亲缘关系[7]。综上所述，传统的细菌学检验与鉴定需要进行细菌培养及一系列生化反应或免疫学检测，环境样品中的细菌检测与鉴定还需要前增菌培养、选择性培养及生化鉴定等程序，既费时又费力，对有些细菌尚不能给出理想的鉴定结果[8]。虽然其存在一些不足但它在鉴定过程中是不可或缺的，必需得进行。2仪器自动化鉴定随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应用,微生物菌种鉴定逐渐由传统的形态学观察和人工生理生化实验鉴定发展进入了基于仪器自动化分析的鉴定系统阶段。近20年来，不断推出并取得了一些效果，如VITEK系统

7、、MDI系统、BIOLOG系统、SENSITITRE系统、AUTOSCEPTOR系统以及MICROSCAN系统等[9]。下面以BIOLOG微生物鉴定系统为例，简述微生物自动鉴定系统的工作原理：Biolog微生物自动分析系统是美国Biolog公司从1989年开始推出的一套微生物鉴定系统，发展到现在已经能鉴定包括细菌、酵母、丝状真菌在内的近2000种微生物，其中酵母菌有52个属、267个种。与其他鉴定系统相比，Biolog微生物自动鉴定系统能利用计算机进行数据分析，自动化和标准化程度高，大大简化了鉴定程序，具有数据库广、鉴定范围大、快速鉴定等

8、优点[10-11]。细菌在利用碳源时，会将四哇类氧化还原染色剂(TV)还原成紫色，从而在鉴定微平板上形成该菌株特征性的反应模式或“指纹图谱”，通过纤维光学读取设备读数仪来读取颜色变化，由计算机