分子荧光分析

《分子荧光分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、第三章分子荧光分析法Chapter3MolecularFluorescence第一节概述一、分子荧光分析法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法物质分子第一节概述一、分子荧光分析法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法物质分子二、分子荧光与荧光量子效（产）率分子荧光与荧光量子效产率1.分子荧光化合物分子吸收电磁波并发射出另一波长电磁波化合物分子吸收电磁波并发射出另一波长电磁波吸收电磁波入ex、10定性km、If发射光定量激发光2.荧光量子效产）率荧光分子发射与吸收的光量子数Z比荧光量子效（产率荧光强度（If）发

2、射的光量子数?f==吸收的光量子数吸收的光强度（la）第一节概述一、分子荧光分析法三、溶液的荧光强度If=2.3?flOelc=Kc该关系式是如何得来的？该关系式是如何得来的？?f=lf/lalf=?flaA=?logIt=8C110利用物质分子的荧光进行分析测定的方法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法物质分子?f=If/Ia荧光溶液的吸光度三0.05荧光溶液的吸光度荧光定量分析基本关系式二、分子荧光与荧光量子效(产)率分子荧光与荧光量子效产率It=I0xl0?wcl=I0xe?2.3£clIa=I0?11=I0(1?e?2.3ecl)(?2.3ecl)2(?2.3ecl)3

3、?2.3scl=1?2.3ecl??????If=?fI0(l?e?2.38cl)e2!3!?2.3scl=1?2.3ecl若de<0.05eIf=2.3?flOelc=Kc第一节概述一、分子荧光分析法三、溶液的荧光强度If=2.3?fIOwlc=Kc四、溶液荧光的猝灭荧光物质分子其它物质分子相互作用引起荧光强度降低的现象荧光猝灭法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法物质分子?f=If/Ia荧光溶液的吸光度S0.05荧光溶液的吸光度荧光定量分析基本关系式二、分子荧光与荧光量子效（产）率分子荧光与荧光量子效产率第二节荧光光谱仪第二节荧光光谱仪一

4、、荧光光谱仪的基本结构光源激发光单色器狭缝发射光单色器信号显示系统检测器10样品池透射光ItF第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1•光源光源激发光单色器样品池为荧光测定提供足够强度的、稳定的激发光为荧光测定捉供足够强度的、稳定的激发光足够强度的伍灯、高压汞灯、伍灯、高压汞灯、激光器发射光单色器检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1•光源眾灯、高压汞灯、眾灯、高压汞灯、激光器将光源发出的复合光分解为单色光干涉滤光片、干涉滤光片、光栅发射光单色器检测器光源激发光单色器样品池2.激发单色器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的

5、基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1•光源眾灯、高压汞灯、眾灯、高压汞灯、激光器干涉滤光片、干涉滤光片、光栅发射光单色器检测器光源激发光单色器样品池2.激发单色器3.吸收池盛放试样的容器不吸光、无荧光、四壁透明不吸光、无荧光、熔融石英第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1•光源眾灯、高压汞灯、佩灯、高压汞灯、激光器干涉滤光片、干涉滤光片、光栅将荧光物质产生的荧光分解为单色光光栅发射光单色器检测器光源激发光单色器样品池2.激发单色器3.吸收池4.发射单色器熔融石英四壁透明第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1•光源眾灯、高压汞

6、灯、佩灯、高压汞灯、激光器干涉滤光片、干涉滤光片、光栅光栅发射光单色器检测器光源激发光单色器样品池2.激发单色器3.吸收池5.检测器4.发射单色器熔融石英四壁透明将荧光信号转换为电学信号灵敏度高光电管、光电倍增管、光电管、光电倍增管、CCD、二极管阵列、光子计数器、二极管阵列、第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件三、激发光选择与激发光谱激发光谱：荧光强度与激发光波长间的关系曲线。激发光谱：荧光强度与激发光波长间的关系曲线。激发光波长：激发光波长：最大激发波长入ex与紫外吸收光谱一致发射光单色器检测器光源激发光单色器样品池第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪

7、的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件三、激发光选择与激发光谱四、发射光选择与发射光谱发射光谱：荧光强度与发射光波长间的关系曲线。发射光谱：荧光强度与发射光波长间的关系曲线。发射光波长：发射光波长：最大发射波长Xem光源激发光单色器样品池最大激发波长入ex发射光单色器检测器与激发光波长无关Stokes位移位移镜像规则第三节分子荧光分析法的应用一、荧光分析法的特点1.灵墩度高灵墩度高（1〜lOOppb）暗背景下测量2.选择性好3.提供的物理参数较多4.方法简便、试样用量少方法简便、二、荧光定性分析