分子荧光分析-N

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1、第三章分子荧光分析法Chapter3MolecularFluorescence第一节概述一、分子荧光分析法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法第一节概述一、分子荧光分析法利用物质分子的荧光进行分析测定的方法化合物分子吸收电磁波并发射出另一波长电磁波二、分子荧光与荧光量子效(产)率1.分子荧光2.荧光量子效(产)率荧光分子发射与吸收的光量子数之比lex、I0lem、If定性定量激发光发射光第一节概述一、分子荧光分析法二、分子荧光与荧光量子效(产)率利用物质分子的荧光进行分析测定的方法三、溶液的荧光强度荧光定量分析基本关系式

2、荧光溶液的吸光度≤0.05该关系式是如何得来的？若第一节概述一、分子荧光分析法二、分子荧光与荧光量子效(产)率利用物质分子的荧光进行分析测定的方法三、溶液的荧光强度荧光定量分析基本关系式荧光溶液的吸光度≤0.05四、溶液荧光的猝灭荧光物质分子其它物质分子相互作用引起荧光强度降低的现象荧光猝灭法第二节荧光光谱仪第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构发射光单色器样品池激发光单色器光源I0透射光检测器信号显示系统FIt狭缝第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1.光源为荧光测定提供足够强度的、稳定的激

3、发光氙灯、高压汞灯、激光器发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1.光源氙灯、高压汞灯、激光器2.激发单色器将光源发出的复合光分解为单色光干涉滤光片、光栅发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1.光源氙灯、高压汞灯、激光器2.激发单色器干涉滤光片、光栅熔融石英盛放试样的容器不吸光、无荧光、四壁透明3.吸收池发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光

4、光谱仪的主要部件1.光源氙灯、高压汞灯、激光器2.激发单色器干涉滤光片、光栅熔融石英四壁透明3.吸收池将荧光物质产生的荧光分解为单色光4.发射单色器光栅发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件1.光源氙灯、高压汞灯、激光器2.激发单色器干涉滤光片、光栅熔融石英四壁透明3.吸收池4.发射单色器光栅将荧光信号转换为电学信号光电管、光电倍增管、CCD、二极管阵列、光子计数器5.检测器灵敏度高发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本

5、结构二、荧光光谱仪的主要部件三、激发光选择与激发光谱激发光谱：荧光强度与激发光波长间的关系曲线。激发光波长：最大激发波长lex与紫外吸收光谱一致发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第二节荧光光谱仪一、荧光光谱仪的基本结构二、荧光光谱仪的主要部件三、激发光选择与激发光谱最大激发波长lex四、发射光选择与发射光谱发射光谱：荧光强度与发射光波长间的关系曲线。与激发光波长无关发射光波长：最大发射波长lemStokes位移镜像规则发射光单色器样品池激发光单色器光源检测器第三节分子荧光分析法的应用二、荧光定性分析很少采用利用荧光激

6、发和发射光谱实现三、荧光定量分析标准曲线法与紫外-可见分光光度法相同标准对比法A≤0.05定量依据定量方法一、荧光分析法的特点1.灵敏度高(1~100ppb)暗背景下测量2.选择性好3.提供的物理参数较多4.方法简便、试样用量少第四节分子荧光的产生一、分子发光与分子荧光激发能量激发定性lI样品样品发射定量激发能量电磁波化学能生物能分子发光荧光、磷光化学发光生物发光分子发光分析的特点灵敏度高、选择性好光致发光化合物分子吸收能量从基态电子能级跃迁至激发态，若其返回基态时释放出电磁辐射，则产生分子发光。第四节分子荧光的产生一、分

7、子发光与分子荧光二、荧光和磷光的产生1.分子的激发基态激发态激发单重态激发三重态第四节分子荧光的产生一、分子发光与分子荧光二、荧光和磷光的产生激发单重态、激发三重态1.分子的激发2.激发态分子的去活化a.振动驰豫激发单重态激发三重态激发态分子将过剩的振动能量以热的形式传递给周围分子，从而失活到该电子能级的较低振动能层。第四节分子荧光的产生一、分子发光与分子荧光二、荧光和磷光的产生1.分子的激发2.激发态分子的去活化a.振动驰豫b.内转换激发态分子通过振动能层间的重叠由较高电子能级失活到较低电子能级的较高振动能层。激发单重态

8、激发三重态激发单重态、激发三重态第四节分子荧光的产生一、分子发光与分子荧光二、荧光和磷光的产生1.分子的激发2.激发态分子的去活化a.振动驰豫b.内转换激发单重态激发三重态处于第一单重激发态最低振动能层的荧光分子，发射光子返回基态的过程。c.荧光发射激发单重态、激发三重态第四节分子荧光的产生一、分子发光