生物化学实验复习总结题

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1、生物化学实验复习题:1.试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171〜195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。2.淀粉含量测定的方法有儿种？比较各方法特点。淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。1、酸水解法：面粉经乙醯除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖,按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其屮淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双

2、糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在17C195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。3.简述旋光法测定淀粉的关键步骤。1.样品的处理在电子天平上称収小麦粉2.5000g置于三角瓶中一加入50ml1%HC1混成浆状（不能有结块）一沸水浴中准确加热15min-先加lml30%ZnS04混匀一再加lml15%亚铁鼠化钾混匀一移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤一弃去最初15ml收集其余滤液。2.旋光度测定取滤液20

3、ml置于旋光管屮，先用1%HC1调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测a4.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。ccx100淀粉含量(％)xlOO.LxW其中二Wo=182.7L—2dmWz样品质量（g）表R—1不同谷物淀粉的比旋光度iWi种[«1d20品种[«1d20小麦182.7195.4黑麦184.0小米171.4人麦181.5养麦179.5水稻185.9燕麦181.3.1.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。含氮的有机物与浓硫酸共热时，其屮的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用牛成硫酸镀。浓

4、碱可使消化液屮的硫酸镀分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸惚到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算岀待测物中的总氮量。2.蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。①染料法，该法近年在某些方面有取代经典的Lowry法趋势，因为它操作简单，反应时间短，染料-蛋白质颜色稳定，抗干扰性强。本法的缺点是：对于那些与标准蛋白氨基酸组成有较大差异的蛋白质，有一定误差，因为不同的蛋白质与染料的结合是不同的,故该法适合测定与标准

5、蛋白质氨基酸组成相近的蛋白质。双缩K(Biuret)法，此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩服法常用于快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。酚试剂法(Lowry)法及紫外吸收法双缩腺法操作简单，线性关系好，但灵敏度差，样品需要量大，测量范围窄，因此在科研上的应用受到限制；而酚试剂法弥补了它的缺点，因而在科研中被广泛采用，但是它的干扰因素多；②定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin—酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1

6、.Omg氮,误差为±2%费时10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩關法（Biuret法）灵敏度低20mg中速20~30分钟多肽键+碱性Cu2+®紫色络合物硫酸讓；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法较为灵敏50〜100mg快速10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嚓吟和喀咙；Folin—酚试剂法（Lowry法）灵敏度高5mg慢速40〜60分钟双缩腺反应；磷钮酸—磷卡乌酸试剂被Tyr和Phc还原硫

7、酸鞍；Tris缓冲液；廿氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化考马斯亮蓝法（Bradford法）灵敏度最高5mg快速5〜15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液；SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化1.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g-0.4000g置于凯氏试管底部一加混合混合催化剂0.5g和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取岀放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至1

8、00ml容量瓶定容一即得样品消化液。同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3ml浓硫