植物组织培养之烟草的再生

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1、植物组织培养烟草的再生、彳亠、■前S植物组织培养，即是用无菌方法使植物体的离体器官、组织和细胞在人为提供的条件卜•生长和发育的所有培养技术。是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官、组织或细胞以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。植物组织培养的历史可以追溯到19世纪末和20世纪初，在不断发展中其技术得到不断完善，也显示出巨大的应用价值,某些技术已经在农业生产中直接或间接地产生了显著的经济效益。植物组织培养的优点有很多，可以人为控制培养条件，它的生长周期短，繁殖率高，同时有利于保持原来品种的特性，而

2、口管理方便，利于工厂生产和口动化控制。一.实验目的学习植物组织培养的理论知识，并能把理论知识投入到实践当中，个人完成植物组织培养过程。掌握组织培养相关仪器设备的使用原理、技术要求和注意事项。能制备MS培养基，包括母液的配制和保存，培养基的合成和灭菌等。通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，初步掌握组织培养的无菌操作技术，了解并掌握愈伤组织诱导基本程序和方法。了解植物在培养中的生长过程以及如何移植到环境中栽培。实验采取分组的形式，组内成员合作完成，也捉高了同学们的操作谨慎性。二.实验原理植物组织培养在操作上有以下几个方面的特点：1.组织培养的主要过程都是在无菌条件卜•进行的，相关的实验材料和仪器都

3、要进行灭菌处理。2.组织培养在多数情况下在人工培养基上进行的，培养基中包含了植物生长所需的物质。培养过程屮的环境温度、光照强度和光照吋间也都是人工设定的。1.组织培养的起始材料町以是植物的器官（根、茎尖、叶、花、果实等）、组织（花约、胚、胚珠、胚乳、形成层等），也可以是单个的细胞，它们都是处于离体状态下。2.组织培养的目的是最终实现细胞的全能性。3.组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，形成克隆；通过改变培养基成分调控培养物的状态和发育方向。4.组织培养是在封闭的容器中进行，容器内气体和环境气体通过封口材料进行交换，水分不易散失。植物组织培养主要过程:脱分化离体的植物器官、组织、细胞愈伤组织

4、再分化再生植株细胞的全能性保证了组织培养的可行性。一个植物细胞能产生一个完整植株的固有能力称这为细胞的全能性(Celltotipotency)o细胞全能性是指植物细胞具有全套遗传信息，不管是性细胞还是体细胞，在特定环境下仍能进行表达，而产生一个独立完整的个体。一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再M复到未分化状态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。将己分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。再分化指经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。脱分化细胞不断进

5、行分裂，从而形成了愈伤组织，即指在人工培养基上外植体长出来的一团无序生长的薄璧细胞。愈伤组织在培养基上生长一•段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代，而外植体的最初培养叫做初代培养。当试管苗在瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完时就要转接，进行继代，可迅速得到大量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。因此，按培养过程可分为初代培养和继代培养两种类型：1•初代培养(Primaryculture)：指外植体的最初培养。2.继代培养(Subculture)：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，称为继代培养。若按照

6、组织培养的材料可分为:1.纽•织、器官或细胞培养：指利用生物体各部分组织、器官或细胞进行离体培养，使之形成愈伤组织或完整有机体的技术。2.原生质体培养：指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下,依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。本实验是对烟草的初代培养。切取烟草叶片的部分叶块接种到固体培养基上培养，三周后形成愈伤组织。一.实验材料和试剂、仪器材料：烟草叶片试剂：MS培养基所需的齐类约品、蔗糖、琼脂条、lmol/L的NaOH溶液、lmg/ml6-BA>70%酒精、升汞溶液、蒸纟留水仪器：电子天平、药匙、烧杯、移液管、洗耳球、量筒、容量瓶、塑料瓶、搪

7、瓷杯、电炉、玻璃棒、pH计、漏斗、锥形瓶、牛皮纸、棉绳、培养血、试剂瓶、滤纸、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台、酒精灯、银子、解剖刀、酒精棉、培养箱一.实验步骤(-)MS培养基前期准备：1.将各种要用到的量筒、烧杯、移液管、玻璃棒、漏斗、容量瓶、锥形瓶等器皿洗净烘干后放在指定的位置，配制过程屮所需电炉、酸度计、高压灭菌锅、作盖瓶用的牛皮纸、棉绳等设备也要准备好。(二)MS培养基配制1.称取药品根据培养基