1 蛋白质化学(参考答案)

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1、《生物化学》(B)练习题参考答案(氨基酸及蛋白质)1、(1)先计算各氨基酸的等电点:GlypI=6.07;AsppI=2.95;LyspI=9.80;LyspI=7.69(2)根据pH与pI关系判断各氨基酸在不同pH下的带电性质,如下:氨基酸pH1.0pH2.1pH4.0pH10.0甘氨酸(Gly)+++-天冬氨酸(Asp)++--赖氨酸(Lys)+++-组氨酸(His)+++-2、(1)R基为非极性的氨基酸:甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、缬氨酸Val、亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、脯

2、氨酸Pro、苯丙氨酸Phe、色氨酸Trp;(2)R基为不带电荷极性的氨基酸:丝氨酸Ser、苏氨酸Thr、半胱氨酸Cys、天冬酰胺Asn、谷氨酰胺Gln、酪氨酸Tyr;(3)R基为带正电荷极性的氨基酸:精氨酸Arg、赖氨酸Lys、组氨酸His;(4)R基为带负电荷极性的氨基酸:谷氨酸Glu、天冬氨酸Asp;3、脯氨酸(Pro)为亚氨基酸;除甘氨酸(Gly)外都有旋光性;缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸的R基团非极性较强,互相排斥,可使a-螺旋变得不稳定。4、组氨酸在生理pH条件下具有缓冲作用;在pH6.0时带

3、净正电荷的氨基酸主要有赖氨酸、精氨酸、组氨酸。2+5、在pH3左右,氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是减刑氨基酸(A)>A+0中性氨基酸()>酸性氨基酸(A)。因此氨基酸的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸,最后是碱性氨基酸,由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用,所以其洗脱顺序为:Asp,Thr,Gly,Leu,Lys。6、茚三酮在弱酸性溶液中与α-氨基酸共热,引起氨基酸氧化脱氨脱羧反映,(其反应化学式见P139),其中,定量释放的CO2可用测压法测量,从而计算出参加反应的氨基酸

4、量。7、pI=(2.09+3.86)/2=2.988、具有紫外吸收能力的氨基酸有Trp、Tyr、Phe;其中以Trp的吸收最强。9、天然蛋白质在受到物理或化学因素(如热、酸、碱、紫外线、脲、表面张力等)影响时,生物活性丧失、不对称性增加及其它理化性质发性改变的现象,称为蛋白质变性。其实质是蛋白质分子中次级键被破坏,一级结构完好。10、由(1)知:A肽的N末端为Asp或Asn;由(2)知:A肽的C天端为Val;1由(3)知,其中第一个小肽因pH6.4时净电荷为0,故Glu和Asp中有且仅有一个是酰胺形

5、式,同时由(1)及胰蛋白酶的专一性知该小肽为Asp/n-(Glu/n,Ala,Tyr)-Lys;第二小肽因生成DNP-His,故N末端为His,又在pH6.4净电荷为正及(2)中结果知该小肽为His-Gln-Val;由(4)知,第一小肽在pH6.4净电荷为0,故Asp为酰胺形式,即Asn;因此第(3)中第一小肽中Glu为酸性形式。此三个氨基酸序列为Asn-Ala-Tyr。第二个小肽在pH6.4净电荷为正,进一步验证了二个Glu中有一个是酰胺形式即Gln。联合(3)中第一小肽和(4)中第一小肽的结构知

6、(3)中第一小肽序列为Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys,再将此与(3)中第二小肽His-Gln-Val联合知A肽的序列为:Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val11、SDS(十二烷基硫酸钠)为蛋白质变性剂,它与蛋白质定量结合后使蛋白质全部带负电荷,并且使蛋白质全部形成近似于椭球形,因此在聚丙烯酰胺凝胶电泳时蛋白质全部向正极移动,迁移率仅取决于蛋白质分子大小,根据标准分子量大小与收集的洗脱液体积(即与迁移率对应)对数直线关系即可根据求知蛋白质的洗脱液体积求出未知蛋白质的分

7、子量。12、BPG(2,3-二磷酸甘油酸)对血红蛋白氧合曲线的影响如右图所示。BPG降低了血红蛋白对氧的亲和力,正常人从海平面到高山上血液中的BPG浓度会从5mmol/L升高到8mmol/L,这一变化使得血红蛋白的氧合S形曲线向右移,即降低了血红蛋白对氧的亲和力,从图中可知在海平面上血液从肺到组织中的△Y=0.38,若没有BPG效应,则在高山环境中△Y=0.30,而因有BPG效应后,△Y=0.37,即能够提供更多的氧为组织所用,几乎与平地(△Y=0.38)差不多,从而保证人在高山环境中适应。13、C

8、14、蛋白质凝胶过滤的基本原理是不同大小的蛋白质流经凝胶时,分子大的不能进入凝胶孔内的网状结构而直接随溶剂在凝胶珠之间的孔隙向下流,最后最先流出柱子,而分子小的蛋白质因要流经网状凝胶孔,故而流经的路途相对于大分子蛋白质要长得多,因此最后流出凝胶柱,即最后才被洗脱出来。盐溶是指向蛋白质溶液中加入少量的中性盐时会增加蛋白质的溶解度,此现象称为盐溶;若向蛋白质溶液中加入大量中性盐时反而会因自由水成为盐离子的水化水而降低蛋白质的溶解度合使其从溶液中析出,此现象称为盐析。15、

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