刺梨细胞中SOD的几种提取方法研究

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1、讲窝与删——————1沥丽而』幽见∞旧团国脑田院万方数据李兰，郭丹钊，孟庆阳(河南科技学院生物工程系，河南新乡453003)摘要：对从剌梨细胞中提取超氧化物歧化酶(Superoxidedlsmutase，SOD)的工艺过程进行了研究。通过对热变性法、等电点法、丙酮分级沉淀法等几种方法的实验分析比较．找出一套操作简便，SOD总收率高的提取工艺。关麓词坤1梨．超氧化轴歧化酶，提取方法，分析比较Abstract：Anextractionprocesstopurifysuperoxidedismutase(SOD)fromRosaroxburghiiceilswass

2、tudiedInthispaperBycomparingtheexperimentaIresultsobtainedbydifferentWaysoffreatment{nctudinClheattreatmentIsoelectricfractionandacetoRefractionation．anewandsimpleprocesswasfoundtoachieveahighSODrecoveryl叠vwords：Rosaroxburghiisuperoxidedismutase；extraction；comparison巾图分揽号：1"32012*5文

3、献标识码：A文章编号：1002—0306(2006)02—0071—03超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)是一种具有清除体内超氧自由基的金属酶粪，它能有效的清除机体内超氧自由基，从而有效的预防活性氧对生物体的毒害作用，因而具有抗辐射，抗肿瘤及延缓机体衰老等功能，药用价值极高。刺梨(Rosaroxburghii)，又名缫丝花，系蔷薇科落叶丛生灌术，为我国新开发的三大果树资源之一，果实富含多利-维生素，尤以维生素C含量最高，比以富含维生素C著称的猕猴桃还高5～22倍，被誉为Vc之王。刺梨为加工型营养珍果，可直接用于食品、饮料工业，还可

4、入药，因而受到国内外的关注。近年来，发现刺梨中超氧化物歧化酶的含量也很高。为了寻找一种收率比较高的方法，现在利用几种SOD的提取方法，来比较找出·种比较理想的提取工艺，以利于牛产。收稿日期：2005—07一15作者简介：率兰(1972)，士，本科，实验师，研究方向：发酵食品。1材料与方法1．1材料与仪器刺梨产白河南南召丘陵地区，在2004年采收后．在实验室背阴晾干后存放在冰箱中备用；邻苯三酚、丙酮、氯化钠、磷酸、盐酸、氢氧化钠、Tris等试剂均为分析纯。台秤GB336—85型；电子天平JAl003型；恒温水浴箱XMTB型；高速冷冻离心机SIGMA3K30型；紫

5、外分光光度计UV755B型；冰箱新飞BCD一245D型；微型植物粉碎机FZl06型。1．2实验方法将刺梨5009用微型植物粉碎机破碎后，用0．5mol／LNaCl溶液于4℃下浸泡过夜，四层纱布过滤，然后高速冷冻离心除杂，制成SOD粗酶原液。通过热变、等电点沉淀、丙酮分级沉淀等方法处理后，测定处理液的SOD酶活力及考察SOD收率和纯化效果。1．3分析方法1．3．1酶活性的测定方法SOD酶活用邻苯三酚自氧化法测定。soD酶活性单位定义为：在lmL反应液中，每分钟抑制邻苯_三酚自氧化速率50％时的酶量为一个活性单位。I．3．1．1酶液的制取1．31．2邻苯三酚自氧化

6、速率的测定取5mL、pH8．2、50mm01／L嘶s—HCl缓冲液，加IOImL50mmol／L邻苯三酚，摇匀，在325nm下立即测定，每隔05rain测一次(眦pH8．2THs—HCI缓冲液为空白)，自氧化速率控制在O．060-0．0650D／min．1．3．1．3样品中SOD测定取5mL、pH8．2、50rrmaol／Ltris—HCl缓冲液，加待测样品的粗酶原液151JJL，加10阻L50mmol／L邻苯三酚，摇匀，立即以上法测定。按下面公式计算：坠塑些：万方数据研完与探讨ScienceandTechnologyofFoodIndustry。’’’⋯’一

7、’’。样品酶活。['t(U／mL)=可V菇,-V丽2×V。昔式中V0-白氧化速率，OD／min；V【一样液速率，OD／min；V2-样液体积，mL；V一反应液总体积．mL；n．稀释倍数。2结果与讨论2．1热变性法SOD是一剥·热稳定性很好的酶。当温度低于80℃时，短时间的热处理酶活力损失不大，而一般杂蛋白却在高于55℃易变性沉淀。冈此，取45、50、55、60、65、70℃，时间15、20、25、30rain进行二因素多水平三重复热变性实验，同时测定酶活力。用4支试管，分别加入刺梨租酶原液3mL，然后放在恒温水浴锅中进行不同温度、不同时间的热变处理，然后测定酶

8、活，每次操作重复3次，数据见袁1。表1