基础科学前瞻性人才培育计画

《基础科学前瞻性人才培育计画》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基礎科學前瞻性人才培育計畫實驗二以HPLC分離紅酒中的多酚化合物Aug,2005以固相微萃取搭配高效液相層析分析食品中兒茶素的含量前言多酚類化合物是近年來十分流行的抗氧化劑，這一類的化合物可以在洋蔥、葡萄、藍莓、綠茶、玫瑰、喇叭花等植物中發現，而紅酒中也有許多的多酚化合物。紅酒中主要含酚酸、兒茶素、花青素、黃酮醇等多酚類化合物，較詳細的資訊可参考第一個實驗『以SPE分離紅酒中多酚』的原理。在第一個實驗中，以固相萃取的方式分離多酚化合物，所收集到的每一個部份不是純物質，可能含有一個以上的化合物。如依紫外/可見光譜定量，所定出的為每一

2、類物質的總量，無法訂定出單一化合物的含量。因固相萃取最主要的功能為1.濃縮待測物；2.依化合物的極性做初步的分離以去除一些會干擾分析結果的雜質，所以實驗一所得的結果是可以預期的。但分析的最終目的是想知道特定化合物在樣品中的含量，所以必需使用其他的分析工具。以下的實驗可以視為實驗一的延續，在實驗中將加入固相微萃取的技術，進一步以高效液相層析來探討紅酒、綠茶或其他飲料中單一多酚類化合物，兒茶素，的含量。實驗的流程可以以下的流程圖來表示：實驗一紅酒SPEFractionation酚酸兒茶素黃酮醇類花青素HPLCanalysis決定此部分

3、中兒茶素的含量•以SPME吸附兒茶素實驗二及Naphthalene再以HPLC分析吸附量,以比較同一種纖維對不同化合物的吸附實驗三第1頁，共10頁基礎科學前瞻性人才培育計畫實驗二以HPLC分離紅酒中的多酚化合物Aug,2005實驗一以SPE分離紅酒中的多酚化合物目的以固相萃取管柱分離紅酒中的多酚類化合物，以學習分析化學中樣品前處理的方法。原理“多酚（Polyphenol）”並是一個單一的化合物，其所指的是一類的化合物，在結構上因具有一個以上的“Phenolicgroup”，所以被稱為多酚。這一類的化合物普遍存在於許多的植物中，如洋

4、蔥、葡萄、藍莓、綠茶、玫瑰、喇叭花等。部分的多酚化合物是植物色素，使花朵具有美麗的顏色。現在“多酚”是十分流行的化合物，市售的許多飲料及食品都標榜含有“多酚”，因為多酚類化合物是很好的抗氧化劑，除了能幫助身體清除自由基外還有防癌的功效。釀造紅酒的原料是葡萄，所以紅酒中含有許多的天然物，包括多酚。其他含有多酚的食物包括綠茶、巧克力，也由這類化合物也影響這些食物的顏色及口感，使其嚐起來略為苦澀。表一所列的為紅酒中的多酚及其含量。這些多酚類的化合物依極性可分為三大群：（1）酚酸(Phenolicacids)，（2）兒茶素及花青素(Cat

5、echinsandAnthocyanins)，（3）黃酮醇類(Flavonols)。圖一為其結構。圖一中的這些化合物都具有多個酸性的氫氧基（-OH,hydroxylgroup），因此可以藉著調整溶液酸鹼度的方式，使氫氧基解離、釋放出氫離子，多酚即成為帶電的化合物。當溶液的酸鹼度為7時，Phenolicacid會離子化而成為帶電的物質，其餘的多酚類化合物則因其pKa較高，所以仍維持中性的狀態。Catechins及Anthocyanins則在酸性的狀況下會離子化（想想看，為什麼？）。為了分離上述三種極性不同的多酚類化合物，實驗設計上即

6、是以選擇合適的固相萃取管柱及調節溶液酸鹼度的方式，以達到分離的目的。因紅酒的主要成分為水，酒精的含量不高，所以可以視為水溶性的樣品，所以選擇逆相的固相萃取管柱（C-18SPE）作為分離的工具。首先調整紅酒樣品的酸鹼度至7，離子化的Phenolicacid不會被管柱中非極性的吸附劑所吸附，直接隨溶液流出而被收集，而Catechins、Anthocyanins、及Flavonols因極性較低，會被吸附劑所吸附而留在管柱內。接著加入HCl降低酸鹼度使Catechins/Anthocyanins離子化，最後利用極性不同的兩種溶劑分別將Ca

7、techins、Anthocyanins、及Flavonols沖堤出來。先以含16％acetonitrile的水溶液將Catechins/Anthocyanins沖堤出，再以乙酸乙酯第2頁，共10頁基礎科學前瞻性人才培育計畫實驗二以HPLC分離紅酒中的多酚化合物Aug,2005（Ethylacetate）沖堤出Flavonols。由於化合物的顏色不同，可以肉眼看出沖堤液（Eluent）顏色的變化。收集到各類的多酚化合物也會有特定的紫外/可見光光吸收光譜，可以做為辨識化合物之用。藥品及器材C-18逆相固相萃取管柱（Octadecyl

8、C-18solidphaseextractioncolumn,6mL）甲醇（Methanol）乙酸乙酯（Ethylacetate）乙腈水溶液（Aqueousacetonitrilesolution,pH2.0）16%,pH2.0HCl0.01MNa