实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应

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1、实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应实验目的了解细菌常用培养基掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法熟悉细菌各种生长现象熟悉细菌常用生化反应实验内容操作--细菌接种法分离培养法——平板划线法（葡萄球菌/大肠埃希菌）纯种培养法斜面培养基接种法（葡萄球菌/大肠埃希菌）半固体培养基接种法---穿刺接种法（大肠埃希菌/痢疾杆菌）液体培养基接种法（葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌）示教细菌的生长现象液体、固体、半固体培养基常用生化反应乳糖发酵试验Indol试验硫化氢试验尿素分解试验细菌生长繁殖的条件充足的营养物质水，碳源，氮源，无机盐，生长因子

2、合适的外界环境温度酸碱度气体渗透压适合于细菌生长繁殖需要的各种营养物质及在PH(7.2~7.6)条件下配制而成的基质。培养基配成后—〉灭菌培养基培养基（按物理性状分类）液体培养基固体培养基:2～3%ofagar平板：划线分离，菌落计数，分离纯化斜面：纯种移种半固体培养基:0.1～0.5%ofagar观察穿刺线、保存菌种培养基（按营养组分及用途分类）基础培养基：多数菌生长的基本营养成份营养培养基：营养要求高的细菌生长。加入糖，血，血清，酵母浸膏等血平板合成培养基：研究细菌代谢过程。特殊菌的分离培养鉴别培养基：含有特定的作用底物糖发酵管，葡萄

3、糖蛋白胨水选择培养基：在培养基中加入抑制某菌生长的物质肠道致病菌选择培养基：SS培养基，抗生素培养基厌氧培养基庖肉培养基平板划线法注意事项不要说话，严格无菌操作灼烧后接种环要冷却划线时用腕力，不要使接种环嵌入琼脂各个分区要分明在培养皿底部贴标签倒置培养――防止细菌被冲散斜面接种法（1）用左手握住菌种管和斜面培养基管，右手持接种环或接种针。（2）用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。（3）用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。（4）伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划

4、线。（5）接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。半固体培养基接种法（1）用左手握住菌种管和半固体培养管，右手持接种针（2）用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。（3）用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。（4）垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。（5）塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察生长情况。液体培养基接种法（1）用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。（2）在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。示教：细菌在培养基

5、中的生长情况Inliquidmedium菌膜菌沉淀均匀浑浊对照Onsolidmedium：菌落菌苔Insemisolidmedium：1、3：有动力2：无动力葡萄糖糖发酵试验大肠埃希菌　　　产酸产气       ＋产碱杆菌　　不发酵—伤寒沙门菌　产酸不产气＋Indol试验大肠杆菌　　出现红色　＋肖氏沙门菌　不出现红色-硫化氢试验大肠杆菌：不变色者为阴性变形杆菌：穿刺线部位呈黑褐色者阳性尿素分解试验痢疾杆菌：不变色者为阴性变形杆菌：红色阳性