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1、实验十 细菌常用生理生化反应实验培养基的制备生物科学贺冰冰040012010025周二9、0节一、实验目的：1熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤2熟悉高压蒸汽灭菌的原理方法３ 为生理生化反应实验准备培养基二、培养基配方：1、葡萄糖蛋白胨水培养基（用于V.P.反应和甲基红试验）：蛋白胨0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO40.2g,水1000mL，pH7.2，115℃湿热灭菌20min2、蛋白陈水培养基（用于吲哚试验）：蛋白胨10g，NaCl5g，水1000mL，pH7.2-7.4，121℃灭菌20min3、硫化氢实验培养基：蛋白
2、胨10g，NaCl5g，牛肉膏10g，柠檬酸铁铵5g,硫代硫酸钠,5g,蒸馏水1000mL，pH7.0～7.4，分装试管，每管高度4～5cm。11５℃灭菌20min4、硝酸盐还原培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，KNO3（分析纯）1～2g，蒸馏水1000mL，pH7.4，分装小试管，121℃灭菌20min5、柠檬酸盐培养基：NH4H2PO41g，K2HPO41g，NaCl5g，MgSO4·7H2O0.2g，柠檬酸钠2g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，1%溴麝香草酚蓝酒精液10mL。将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示
3、剂，摇匀。制成后为黄绿色，分装试管，112℃灭菌20min后制成斜面。6、富氏明胶培养基：NaCl5g，K2HPO41.5g，KH2PO40.5g，明胶4.0g，蛋白胨0.1g，牛肉膏5g，琼脂15-20g，葡萄糖0.05g，蒸馏水1000mL，pH7.2，115℃灭菌20min7、淀粉培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000mL，琼脂15-20g，121℃灭菌20min8、葡萄糖发酵培养基：蛋白胨10g，NaCl5g，葡萄糖10g,蒸馏水1000mL，琼脂5g,pH7.4，加1%溴甲酚紫指示剂至紫色,
4、115℃灭菌20min三、实验器材：1、药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1NHCl、1NNaOH溶液等。2、器材：小烧杯、1000mL不锈钢杯、电炉、天平、牛角匙、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉塞、三角瓶、橡皮圈。3、高压灭菌锅四、实验方法：１葡萄糖蛋白胨水培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支大试管):换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)2糖蛋白胨水培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支大试管):换算---称量---溶解---调pH值---
5、分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)3硫化氢实验培养基(配200毫升,分装20支小试管):换算---称量---将蛋白胨琼脂溶解---稍冷加入其它成分---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)4硝酸盐还原实验培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支小试管):换算---称量---溶解---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)5柠檬酸盐培养基(固体斜面,配200毫升,分装20支大试管):换算---称量---溶解--
6、-调pH值---加溴麝香草酚蓝指示剂---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后摆斜面6富氏明胶培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):换算---称量---先将明胶溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)---灭菌后收藏7淀粉培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板):换算---称量---先将淀粉溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升
7、三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(121℃,20分钟)---灭菌后收藏8葡萄糖发酵培养基(半固体培养基,配200毫升,分装20支小试管)：换算---称量---溶解---调pH值---加溴甲酚紫指示剂---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃,20分钟)灭菌:按不同培养基的要求将培养基灭菌.灭菌后将柠檬酸盐利用培养基摆斜面，其余垂直放置，收于实验台柜中．五、思考题：1配置各种生理生化培养基时,分别应当注意什么事项?答：各个物质添加后要完全溶解（如果有琼脂的话要加热比较久）在水中，调节pH到合适的范围，然后灭菌。
8、灭菌后分装或者铺平板的时候要在洁净操作台上进行，避免再次污染。如果需要添加抗生素，一定要在灭菌后，冷却到大约五六十度的时候加。2配培养基时，为什么要先调好pH值在加指示剂？答：通
