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1、第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全Sec.1消毒灭菌的常用术语***灭菌(sterilization)杀灭物体上所有微生物的方法,包括杀灭细菌芽胞、病毒、霉菌在内的全部病原微生物和非病原微生物。***消毒(disinfection)杀灭物体或环境中的病原微生物。但不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的药品称为消毒剂。防腐(antisepsis)体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。用以防腐的药品称为防腐剂。同一化学药品在高浓度为消毒剂,低浓度时常为防腐剂。清洁(cleaning)除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。无菌(asepsis)不存在任何活菌、多是灭菌的结果
2、。**无菌操作(antisepsistechnique)防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。Sec.2消毒灭菌的方法物理消毒灭菌法化学消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法(一)热力灭菌法:干热、湿热。(二)辐射杀菌法(三)滤过除菌法(四)干燥和低温抑菌法焚烧用于废弃物品或动物尸体等烧灼用于接种环、试管口等的灭菌。干烤171℃/1h或160℃/2h。红外线0.77~1000μm波长的电磁波,以1~10μm波长的热效应最强。……1.干热灭菌法100℃煮沸5min巴氏消毒法:71.7℃/15~30sec;61.1~62.8℃/30min流动蒸汽消毒法间歇蒸汽灭菌法***高压蒸汽灭菌法:在103.4k
3、Pa(1.05kg/cm2)温度可达121.3ºC,15~20min,可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。……2.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌器湿热灭菌效果为何优于干热灭菌?原因:①湿热中细菌菌体蛋白质较易凝固变性②湿热的穿透力比干热大③湿热的蒸气有潜热效应存在。1、紫外线2、电离辐射:β、γ射线等3、微波(二)辐射杀菌法紫外线杀菌试验紫外灯下50cm处照射30min37℃24h照射后培养结果观察紫外线波长240~300nm的紫外线具有杀菌作用,其中以265~266nm最强。***杀菌机制主要作用于DNA,形成二聚体,干扰DNA的复制与转录,导致细菌的变异或死亡。特点紫外线穿透力较弱,一般只用
4、于手术室等的空气消毒,或用于不耐热物品的表面消毒。紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用。2.电离辐射(包括高速电子、β射线和γ射线)具有较高的能量和穿透力,对微生物有致死作用。常用于大量一次性医用塑料制品的消毒;亦可用于食品、药品和生物制品的消毒或灭菌。3.微波波长为1~1000mm的电磁波可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物质,但不能穿透金属表面。主要用于食品、非金属器械、检验室用品、无菌室和病室中食品用具、药杯及其他用品的消毒。(三)滤过除菌法器具:滤菌器用途:不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。薄膜滤菌器:硝基纤维素膜层流室四、超声波消毒法不被人耳感受的高于20kHz/s的声波,
5、称为超声波。超声波可裂解多数细菌,尤其是G-菌。主要用于粉碎细胞,以提取细胞组分或制备抗原等。(四)干燥和低温抑菌法有些细菌的繁殖体在空气中干燥时会很快死亡,干燥法常用于保存食物。低温可使细菌的新陈代谢减慢,故常用作保存细菌菌种。为避免解冻时对细菌的损伤,可在低温状态下真空抽去水分,此方法称为冷冻真空干燥法。该法是目前保存菌种的最好方法。二、化学消毒灭菌法许多化学药物能影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动,从而发挥防腐、消毒甚至杀菌作用。这些化学药物称为化学消毒剂。一般对人体组织有害,只能外用或用于环境的消毒。***化学消毒剂的杀菌机制①促进菌体蛋白质变性或凝固如酚类、醇类、重金属盐类
6、、酸碱类、醛类等②干扰细菌的酶系统和代谢破坏蛋白与核酸的基团,如某些氧化重金属盐类与细菌蛋白的-SH基结合;③损伤细菌的细胞膜如酚类、表面活性剂、脂溶剂等能降低细菌胞膜和病毒包膜的表面张力并增加其通透性。高效消毒剂杀灭所有微生物包括芽孢。适用于不耐受热力灭菌、进入人体内部的物品含氯消毒剂:次氯酸钠,漂白粉等。水中产氯,次氯酸,新生态氧,杀菌。饮用水,皮肤,地面,排泄物,污水。过氧化物消毒剂:过氧化氢,过氧乙酸,二氧化氯。醛类消毒剂:戊二醛,甲醛。环氧乙烷:高效杀菌,易燃,有毒性。中效消毒剂不能杀灭芽胞,能杀灭繁殖体、真菌和大多数病毒内窥镜,喉镜,阴道窥器,麻醉器材,皮肤粘膜消毒。含碘消毒
7、剂:碘酊,碘伏:沉淀蛋白,氧化杀菌,皮肤、体温计。醇类消毒剂:乙醇:70-75%,皮肤粘膜消毒。异丙醇:作用强,毒性强,器材体温计。低效消毒剂可杀灭多数繁殖体,不能杀灭芽胞、结核分枝杆菌及某些抵抗力强的真菌和病毒。季铵盐类消毒剂新洁尔灭:表面活性剂,清洁作用。皮肤粘膜,地面。氯已定洗必泰:皮肤粘膜,地面。高锰酸钾氧化杀菌作用皮肤粘膜,餐具,水果,蔬菜消毒Sec.3消毒灭菌的运用1、医疗器械物品2、室内空气3、手、皮肤、粘膜4、病人的