实验一游离棉酚的测定

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1、实验一棉籽饼粕中游离棉酚含量的测定一、实验目的掌握国标法测定饲料中游离棉酚含量的原理、方法及结果的表示。二、游离棉酚的测定方法概述一般用在70%丙酮水溶液或在3-氨基-1-丙醇存在下，用异丙醇和正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用比色法、高效液相色谱法测定。比色法：有苯胺法、三氯化锑法、甲氧基苯胺法、间苯三酚法、紫外分光光度法等。苯胺比色法准确度高、精密度好，也是国标方法。HPLC法准确度高，干扰少。HPLC法所测得的结果往往低于比色法。三、方法原理在3-氨基-1-丙醇存在下，用异丙醇与正己醇的混合溶剂提取游离棉酚。苯胺

2、与棉酚结合为苯胺棉酚，在最大吸收波长（440nm）处进行比色测定。该方法适用于棉籽粉、棉籽饼粕和配合饲料中游离棉酚含量的测定。四、仪器与器皿样品粉碎机及分样筛分析天平电动振荡器恒温水浴锅分光光度计容量瓶、具塞锥形瓶、玻璃漏斗、移液管、量筒、玻璃珠五、试剂（1）异丙醇；（2）正己烷；（3）冰乙酸；（4）3-氨基-1-丙醇；（5）苯胺；（6）异丙醇、正己烷混合溶剂：6：4（V/V）；（7）溶剂A：取500ml异丙醇、正己烷混合溶剂，2ml3-氨基-1-丙醇，8ml冰乙酸和50ml水，放入1000ml容量瓶中。再用异丙醇、正

3、己烷混合溶剂定容至刻度。六、操作方法（1）游离棉酚的提取：称取1-2g棉籽饼粕样品于250ml具塞锥形瓶中，加入20粒玻璃珠。准确加入50ml溶剂A。塞紧瓶塞。于振荡器上剧烈振荡1小时（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤。过滤时在漏斗上加盖一表玻璃皿。弃去最初几滴滤液。收集滤液于100ml具塞锥形瓶中。（2）以下操作见下表aba0b0移取2份10ml滤液分别于2个25ml棕色容量瓶中移取2份10ml的溶剂A于2个25ml棕色容量瓶中。用混合溶剂A稀释至刻度，摇匀。加入2.0ml苯胺，沸水浴30min显色用混合溶

4、剂A稀释至刻度，摇匀加入2.0ml苯胺，沸水浴30min显色冷却至室温，用混合溶剂定容，摇匀，静置30min冷却至室温，用混合溶剂定容，摇匀，并静置30min（3）测定吸光度值：在440nm波长处以a0为参比溶液测定空白液b0的吸光度；以a为参比液测定样品测定液b的吸光度。从以b的吸光度值减去b0的吸光度值，得到校正吸光度A。七、结果的计算游离棉酚（mg/kg）=A×50×25×106K×m×V×L×1000式中：A—校正吸光度；K—质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1g-1l;m—试样质量，g；V—测定用滤液的体

5、积，ml；L—吸收池长度，cm；50—提取样品的提取液体积，ml；结果表示与重复性每个试样做两个平行，以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg。：重复性：FG＜500mg/kg时，相对偏差不超过15%；FG在500~750mg/kg时，绝对偏差不超过75mg/kgFG＞750mg/kg时，相对偏差不超过10%；