南医微生物实验课件肥达、肠道等

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1、微生物与免疫学实验（五）主要内容一、录像：真菌二、操作：肥达试验三、示教：肠道杆菌其他细菌真菌肥达试验原理：用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。操作：肥达试验（试管凝集反应）器材：试管6支/人，试管架1个/2人吸管1支/人，标签1个/人已知：伤寒H抗原、O抗原（4人/组）甲型副伤寒H抗原乙型副伤寒H抗原待检：病人血清（1:10稀释）0.5ml生理盐水1234560.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.

2、5ml血清1：401：801：1601：3201：640对照加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5h，观察结果一、糖发酵试验由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同。产酸产气—指示剂变色，小倒管内有气泡；以＋表示产酸—指示剂变色；以＋表示不能分解—指示剂不变色；以－表示指示剂为酸性复红细菌生化反应二、硫化氢试验硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。三、吲哚（靛基质）试验有些细菌分解色氨酸生成吲哚（靛基质），与加入的二甲基氨基苯甲醛反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰红色为阳性；黄色为阴性。四、尿素酶试验有些细菌具有尿素酶，能分解

3、尿素形成大量的氨，使培养基PH上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性；不变色为阴性。肠道杆菌（G—）肠道杆菌的鉴定标本增菌培养接种SS平板双糖铁培养基初步鉴定其他生化反应鉴定血清学鉴定有菌可疑的乳白色菌落SS培养基胆盐枸橼酸盐煌绿乳糖蛋白胨中性红抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱酸：红碱：黄双糖铁培养基上层（固体）下层（半固体）乳糖硫酸亚铁酚红葡萄糖生化反应表葡乳麦甘蔗H2S尿素靛大肠---痢疾------伤寒--/+--变形-----白喉棒状杆菌：G+一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如V、W、X等其他细菌革兰染色Alb

4、ert染色观察白喉杆菌异染颗粒——一端或两端鉴别选择培养基含0.03%～0.04%亚碲酸钾血平板亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落Elek平板炭疽杆菌：G＋粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状炭疽杆菌培养基结核杆菌：罗氏培养基厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌肉毒梭菌产气荚膜梭菌破伤风梭菌：庖肉培养基、毒素动物试验产气荚膜梭菌：血平板（靶样溶血）、庖肉培养基高层琼脂断裂试验、汹涌发酵试验肉毒梭菌：庖肉培养基真菌形态与结构单细胞真菌圆形或卵圆形酵母菌(yeast)多细

5、胞真菌菌丝和孢子丝状菌(filamentousfungus)交织成团或霉菌(mold)二相性(dimorphic)真菌（fungus）大分生孢子厚膜孢子白假丝酵母菌（白色念珠菌）—G+新生隐球菌（新型隐球菌）—墨汁负染真菌培养物新生隐球菌：表面粘稠白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味第6管均匀混浊＋少量凝集＋＋细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集呈颗粒状＋＋＋大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大＋＋＋＋全部凝集，液体澄清，大片凝集块以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价O达到1:80，H达到1:160H甲或H乙达到1:80或以上有诊断意义结果判断血清稀释度菌液1：40

6、1：801：1601：3201：640伤寒H伤寒O甲副H乙副H记录结果*吸管放桶，试管放锅作业示教片：肠道杆菌、其他细菌、真菌肥达试验：原理、步骤、结果、分析