南医微生物实验课件(I)

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1、微生物与免疫学试验（三）实验内容一、录像：微生物学发展史二、示教：细菌生长现象、细菌变异消毒灭菌器材三、操作：药物敏感实验、划线分离细菌生长现象(1)液体培养基沉淀生长、混浊生长、表面生长(2)半固体培养基（0.1%~0.3%琼脂粉）混浊生长、线状生长(3)固体培养基（1.4%~2%琼脂粉）菌落、菌苔液体培养基沉淀生长混浊生长表面生长半固体培养基有鞭毛细菌无鞭毛细菌线状生长混浊生长（动力试验）固体培养基菌苔菌落细菌的变异遗传性变异非遗传性变异遗传性变异（基因型变异）非遗传性变异（表型变异）遗传性

2、变异非遗传性变异基因改变+-遗传+-可逆性-+外界环境-+变异幅度个别细胞群体一、菌落变异（S→R变异）S型菌落(Smooth)光滑菌落—表面光滑有光泽，边缘整齐。R型菌落(Rough)粗糙菌落—表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。菌落变异是由于菌体本身起变化。一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。smoothcloneRoughclone二、鞭毛变异（H→O变异）细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。有鞭毛的细菌点种在琼脂平板上，由于鞭毛的动力使细菌在平板上弥散生长，称迁徙

3、现象，菌落形似薄膜（德语hauch意为薄膜），故称H菌落。若细菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩展的单个菌落，称为O菌落（德语Ohnehauch意为无薄膜）变形杆菌0.1%石炭酸迁徙生长（H）点状生长、单个菌落（O）划线分离注意事项一、只取一环细菌即可二、1区划线部分占平板的1/3至1/2，划线时要连续三、2区与1区、3区与2区之间只有最初1～2条线有连接四、需充分利用平板、注意贴标签位置、平板摆放123药敏实验材料：（G＋菌、G-菌）细菌18－24小时斜面培养物，固体培养基平板，抗菌药物干燥

4、滤纸小圆片（青，氯，南，氟），接种环，镊子，95％酒精方法：无菌法取斜面培养物上的细菌接种环在平板内做连续划线，使细菌密布平板表面用镊子蘸酒精通过火焰三次待冷却后，分别夹取含抗菌药物的纸片，贴在琼脂表面注意：各纸片间距不小于2cm，距平板边缘不小于0.5－1cm，在平板边缘做好标记37度温箱培养24小时后，测量抑菌圈直径药物敏感实验注意事项一、同组人需分别接种G＋、G—细菌二、连续划线、细菌密布平板三、镊子用前、用后必须灭菌并注意防火四、贴纸片距离、纸片标记（与瓶上标记吻合）；贴标签位置青霉素—

5、为β内酰胺类抗生素。繁殖期杀菌，作用机制为抑制敏感菌细胞壁的形成。氯霉素—对G+、G-菌均有抗菌活性。氟哌酸—抗菌谱广，对G-菌和部分G+菌具有较强的抗菌活性。氨曲南—单环类抗生素。作用机制为抑制菌细胞壁的合成，并抑制细胞壁水解酶使细胞渗性发生改变。细菌对药物的敏感度以纸片周围抑菌圈直径的大小为标准。抑菌圈愈大,说明细菌对该药物愈敏感。(1)抑菌圈直径大于15毫米为高度敏感。(2)抑菌圈直径在10-15毫米为中度敏感。(3)抑菌圈直径在7-9毫米为低度敏感。(4)无抑菌圈为不敏感。结果判断:实验

6、报告记录药敏实验结果（表格）通知：下两次实验课需带学生证借显微镜