实验1-1微生物培养基的配制和灭菌

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1、实验1-1（主要自学）微生物培养基的配制和灭菌一、实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。微生物培养基的配制和灭菌二、实验原理1、培养基：是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。2、培养基营养成分：碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。3、培养基的种类（1）培养基按成分可分为：天然培养基、合成培养基和半合成培养基。（2）按用途可分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。（3）按物理状态可分为“固

2、体培养基、半固体培养基和液体培养基。二、实验原理按照培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。3、培养基的种类细菌：pH7.0~8.0放线菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻类：pH6.0~7.0原生动物：pH6.0~8.0初始pH4、通常培养条件：二、实验原理琼脂是最优良的凝固剂，自1880年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。5、凝固剂细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高

3、氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；二、实验原理6、实验室的常用培养基称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。三、培养基配制的基本步骤2.配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。三、培养基配制的基本步骤3.调节pH值培养基溶解均匀

4、并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHCl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。三、培养基配制的基本步骤5.分装将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。三、培养基配制的基本步骤分装后，塞棉塞（胶塞），包扎，灭菌。（1）培养

5、基的灭菌①常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。②本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。6.灭菌三、培养基配制的基本步骤③高压蒸气灭菌条件：一般培养基:1.05Kg/cm2,121.3℃,15-30min含糖培养基:0.56Kg/cm2,112.6℃,15-30min（1）培养基的灭菌6.灭菌（2）器皿的灭菌：干热空气：160℃，2小时（3）无菌室的消毒紫外光化学药物熏蒸（苯酚；高锰酸钾+甲醛）6.灭菌6.灭菌湿热灭菌使用的设备（4）加水装锅盖盖

6、加热当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气正式升压保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）停止加热自然降压至零排放余汽开盖取出灭菌物品趁热摆斜面检验灭菌效果。（5）灭菌的操作过程牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、固体培养基（平板制作）2、固体培养基（斜面制作）2、半固体培养基3、液体培养基四、几种培养基的配置方法牛肉膏蛋白胨固体培养基配方：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂1.5g水100mLpH7.2-7.4灭菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方：琼脂0.3g牛肉膏蛋白胨液体培养基配方：琼脂0g四、几种培养基的配置方法1.按配方称取

7、一定量的试剂、琼脂到250ml的三角瓶中。2.加入100mL水。3.塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好。4.高压蒸汽灭菌。5.灭菌后,当培养基冷却至50℃左右时,无菌倾注平皿(每100ml可制备5-6个平皿)。6.凝固后放冰箱备用。（一）平板固体培养基制作（二）斜面培养基制作1.称取一定量的营养琼脂到100ml的三角瓶中。2.加入100mL水。3.放入水浴锅内溶解。4.在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注