临床专用自动生化分析仪分析技术

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1、第七章临床专用自动生化分析仪分析技术江苏大学基础医学与医学技术学院姜旭淦全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验（第二版）目录浊度自动化分析技术1电解质自动化分析技术2血气自动化分析技术3电泳自动化分析技术42第一节浊度自动化分析技术3基本概念浊度分析通过检测溶液浊度,对物质含量进行分析的方法。临床上多用于特定蛋白的分析。特定蛋白（specialprotein）在机体内具有某种生理功能，疾病状态时又有着特定的病理生理意义的蛋白质。4一、浊度分析的基本原理和方法5（一）浊度分析的基础理论1.胶体溶液粒子对光具有反射、折射、散射和吸收等作

2、用。2.光透射理论朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律：63.光散射理论当入射光通过悬浮在反应溶液固体或胶体粒子时：（1）颗粒直径比入射光的波长小，则散射光比较均匀的分布于颗粒的四周，称为Rayleigh散射。（2）颗粒直径大大地大于入射光的波长（d≥λ），则散射光的分布呈明显不均匀,即前向散射光为主，称为Mile散射。Rayleigh散射Mile散射7颗粒直径<1/10λRayleigh散射1/10λ<颗粒直径≤λDebye散射颗粒直径≥λMile散射8雷莱（Rayleigh）公式：该公式来自气溶胶悬浮微粒，用于溶液时需进行校正。当使用高强度光

3、源（如激光）时，液相悬浮颗粒与非偏振光源的散射作用公式为：Is为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。——散射光强度与颗粒的浓度和分子量有关。94.免疫浊度分析在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原-抗体免疫复合物颗粒，使反应液出现浊度；当光线通过介质中的复合物颗粒时，可形成光的吸收、透射、散射和折射；通过测量透射光或散射光信号强弱，从而推算

4、出被测物的量。10（二）浊度分析的基本方法浊度分析方法的分类根据检测器的位置及其接收光信号的性质：透射免疫浊度法（turbidimetryimmunoassay）散射免疫浊度法（nephelometryimmunoassay）根据复合物形成速度和测定方式：终点浊度法速率浊度法根据浊度形成的原理：沉淀反应免疫浊度法：灵敏度低胶乳凝集比浊法（或粒子强化免疫浊度法）：灵敏度高111.透射免疫浊度法在光源的光路0o角方向上测量透射光强度，并研究其与被检测溶液微粒浓度关系的方法。2.散射免疫浊度法在光路的5o～90o角的方向上测量散射光强度，并研究其与被测溶液中

5、微粒浓度关系的方法。121.透射免疫浊度法（turbidimetricimmunoassay）（1）沉淀反应免疫透射浊度法：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成免疫复合物，使反应液出现浊度。免疫复合物的形成有时限性，即当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物，几分钟到数小时才形成可见的复合物。为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4%聚乙二醇（MW6000～8000），可使免疫复合物形成在3min～l0min完成。（2）粒子强化免疫浊度法：选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。

6、当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。13免疫胶乳比浊法用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚，使透射光和散射光即出现显著变化。14透射免疫比浊法溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm)溶液中形成的复合物分子要足够多控制抗原抗体反应的温度和时间加增敏剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线反

7、应要求152.散射免疫浊度法16（1）终点散射比浊法（end-pointnephelomtryassay）抗原和抗体反应达到平衡时，免疫复合物形成的量不再增加，反应体系的浊度不再变化（需要十分钟以上）检测形成的抗原抗体复合物的总量。终点散射比浊法可以实现自动化检测，但反应时间较长，且检测灵敏度低于速率散射比浊法的检测水平（µg/L水平）。17（2）定时散射比浊法（fixed-timenephelometricassay）抗原抗体相遇后沉淀反应立即开始，在反应初期极短时间内反应体系检测到的散射光强度变化极不稳定，定时散射比浊法选择的检测时间避开抗原抗

8、体反应初期的不稳定阶段，在抗原抗体反应趋于稳定的某一时间开始测定，这样可以较少系统误差。技术要