《蛋白质的重要性质》PPT课件

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1、第四节蛋白质的重要性质四.蛋白质的重要性质(一)胶体性质蛋白质的分子量1万-100万之间，其分子直径1-100nm之间，在胶体颗粒的范围。蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为在蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如NH3、COO-、OH-、SH、CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易在蛋白质颗粒外面形成—层水膜。所以蛋白质具有胶体性质，如布朗运动、光散射、电泳、不能透过半透膜及具有吸附能力等。利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可用羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质，这个方法称透析（dialysis）。四.蛋白质的重要性质(一

2、)胶体性质(二)两性解离及等电点蛋白质同氨基酸一样也是两性电解质，即能和酸作用，也能和碱作用。蛋白质分子中可解离的基团除肽链末端的-氨基和-羧基外，主要还是多肽链中氨基酸残基上的侧链基团如-氨基、-羧基、-羧基、咪唑基，胍基、酚基、疏基等。在一定的pH条件下，这些基团能解离为带电基团从而使蛋白质带电。四.蛋白质的重要性质蛋白质的等电点（pI）：当某蛋白质在一定的pH的溶液中，所带的正负电荷相等，它在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值叫做该蛋白质的等电点。酸性蛋白、碱性蛋白蛋白质的带电性质与溶液的pH有关。利用蛋白质的两性解离可以通过电泳分离纯

3、化蛋白质。四.蛋白质的重要性质(二)两性解离及等电点蛋白质受到某些理化因素的影响，其空间结构发生改变，蛋白质的理化性质和生物学功能随之改变或丧失，但未导致蛋白质一级结构的改变，这种现象叫变性作用（denaturation）。1.蛋白质变性的概念2.蛋白质变性的因素物理因素：加热、紫外线、超声波、高压等；化学因素：强酸、强碱、脲、盐酸胍、去垢剂、重金属盐等；(三)蛋白质的变性四.蛋白质的重要性质生物活性丧失（酶）；溶解度降低，粘度增大，扩散系数变小（蛋清）；基团位置改变；对蛋白酶敏感性增大。3.蛋白质变性后的表现四.蛋白质的重要性质(三)蛋白质的变性4.蛋白的复性蛋白

4、质的变性作用若不过于剧烈，则是一种可逆过程。高级结构松散了的变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠形成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象称为复性(renaturation)。大多蛋白质变性后，很难复性。四.蛋白质的重要性质(三)蛋白质的变性(四)蛋白质的沉淀加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，蛋白质的胶体溶液就不稳定,并将产生沉淀。能使蛋白质沉淀的试剂有：1.高浓度中性盐（NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白质的电荷）这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析，用于蛋白质分离制备。2.有机溶剂丙酮、乙醇(破坏

5、蛋白质水膜)四.蛋白质的重要性质3.重金属盐Hg2+、Ag+、Pb+（与蛋白质中带负电基团形成不易溶解的盐,或改变蛋白质的空间结构）4.生物碱试剂苦味酸、目酸、钨酸等（与蛋白质中带正电荷的基团生成不溶性盐）四.蛋白质的重要性质(四)蛋白质的沉淀(五)蛋白质的颜色反应1.双缩脲反应双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。通常可用此反应来定性鉴定蛋白质，也可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定。四.蛋白质的重要性质2.

6、酚试剂（Folin-酚试剂）反应蛋白质分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。这一反应常用来定量测定蛋白质含量。可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定.四.蛋白质的重要性质(五)蛋白质的颜色反应3.茚三酮反应由于蛋白质多肽链两端有游离的-NH2和-COOH，所以蛋白质也可以和茚三酮发生反应。4.考马斯亮兰与蛋白质反应形成蓝色透明物质，在595nm下进行比色。四.蛋白质的重要性质(五)蛋白质的颜色反应(六)蛋白质的的分离、纯化与鉴定1.蛋白质分离、纯化的过程和一般

7、原则（1）前处理（Pretreatment）---细胞破碎，蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来。（2）粗分级（Roughfractionation）当蛋白质混合物的提取液获得后，选用一套适当分离纯化方法，使目的蛋白与大量的杂蛋白分离开。四.蛋白质的重要性质1.蛋白质分离、纯化的过程和一般原则（3）细分级（Finefractionation）是将样品进一步提纯的过程。样品经粗分级以后，一般体积较小，杂蛋白已经大部分被除去。（4）结晶（Crystal）由于结晶中从未发现过变性蛋白质，因此蛋白质的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标