《病理学技术的应用》PPT课件

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1、吕自力简介女，汉族，硕士导师，副教授1991—1996年广西医科大学临床专业学士1996—1999年广西医科大学病理专业硕士2003---2006年中山医科大学病理专业博士1999---至今工作于广西医科大学QQ489506642电话：15907817634，5356534（办公室）病理学常用技术在科研中的应用广西医科大学第一附属医院病理科吕自力尸体剖检autopsy,goldstandard活体组织检查biopsy,frozensections.细胞学检查cytology（一）人体病理学的诊断和研究方法:ABC（二）实验病理学的研究方法动物实验animalexperiment

2、组织和细胞培养tissue&cellculture病理学的研究方法病理学的形态观察方法和新技术大体观察组织学和细胞学观察组织化学和细胞化学免疫组织化学超微结构分子生物学技术流式细胞术计算机图象分析技术qualitativequantitative病理学的应用范围病因学研究发病学的研究基本病理变化—揭示疾病的本质、进行病变诊断、分类、分期以及预后判断药物选择与疗效观察新药开发内容免疫病理学技术常规HE染色及特殊染色分子病理学技术一、HE染色在科研中的运用1、HE染色的用途1）组织结构特点2）细胞形态特点2、HE染色流程固定取材脱水包埋切片染色观察3、HE染色注意事项1）标本采集组

3、织尽可能多尽量获取未坏死组织尽量避免挤压组织标记标本的方位3、HE染色注意事项2）固定A.及时固定（离体30分钟内）B.固定液：10%的中性福尔马林固定；C.骨髓活检、睾丸活检标本也可用Bouin液固定D.电镜标本用2.5%戊二醛固定E.固定液与标本体积比应大于10：1F.固定时间：2-4小时（小），12-24小时（大）二、特殊染色在科研中的应用1、目的1）识别病原体：HP,抗酸，PAS特殊染色的用途2）识别组织：Masson,VG,PAS三、免疫组织化学Immunohistochemistry,IHC原理使用范围试剂配置操作步骤免疫组织化学的原理抗原+抗体-----显色原位半

4、定量蛋白用途临床病理诊断：肿瘤分类诊断上皮来源：CK，EMA间叶来源：Vimentin淋巴组织:LCA科研：组织抗原表达情况试剂准备切片(防脱片)多聚赖氨酸,APES一抗多抗or单抗,兔or鼠,注意种属特异性，针对检测组织种属检测试剂盒EliVisionTMplus检测试剂盒（二步法）SP试剂盒（三步法）SABC试剂盒（三步法）显色试剂盒DAB试剂盒其他H2O2，二甲苯，酒精，缓冲液（PBS，柠檬酸缓冲液），抗原修复液（胰酶），正常动物非免疫血清操作步骤组织切片脱蜡，水化PBS洗3次X3分钟抗原修复一抗（37度1h，4度过夜）封闭内源性过氧化物酶PBS洗3次X3分钟二抗（37度

5、30分钟）PBS洗3次X3分钟苏木素染核自来水洗DAB显色脱水封片PBS洗3次X3分钟结果分析和判断阴性CK—胞浆阳性细胞核阳性---PCNA胞膜阳性注意事项（1）判断原则（2）对照设计（3）非特异染色（4）失败的原因及其处置方法（1）判断原则必须设立染色对照：阴性对照，阳性对照抗原表达必须在特定部位：胞膜、核、浆尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达对免疫组化标记结果的意义不能绝对化（2）对照设计阳性对照：已知阳性表达的组织自身对照：同一标本中不同组织对照阴性对照：A、阴性组织对照：已知阴性表达的组织B、阴性试剂对照：空白对照（3）非特异性染色原因组织内源性成分

6、的干扰：内源性过氧化物酶---白细胞，红细胞内源性生物素---肝、胰、肾组织组织处理不当：内源性过氧化物酶---白细胞，红细胞内源性生物素---肝、胰、肾组织（3）非特异性染色处理方法抗体：纯化，浓度，时间，温度封闭：H2O2，非免疫动物血清清洗：充分显色：时间其他：脱蜡充分，无干片（4）染色失败的原因及处理方法试验片：-阳性对照片：-阴性对照片：-空白对照片：-结果：假阴性原因：操作步骤？试剂？试验片：+阳性对照片：+阴性对照片：+空白对照片：+结果：假阳性原因：切片干涸抗体浓度过高缓冲液配制不对冲洗不彻底显色液配制不对显色时间过长载玻片的粘合剂过厚试验片：+阳性对照片：+阴

7、性对照片：-空白对照片：+结果：假阳性原因：非特异染色，与二抗交叉反应。试验片：+阳性对照片：+阴性对照片：+空白对照片：-结果：可疑阳性原因：阴性对照组织选择不准确，含有靶抗原试验片：+阳性对照片：+阴性对照片：-空白对照片：-结果：阳性原因：方法可靠，实验片含靶抗原。阴性对照切片-，阳性对照标本和待检测切片呈弱阳性原因：标本固定不当抗体试剂问题：浓度、效价低抗原修复不当显色时间短切片染色深或整张切片出现染色抗体浓度过高切片显色时间过长组织没有正确封闭冲洗不够充分切片出现非特异性背景染色内