第十七章病理学常用技术的原理及应用_病理学课件

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1、第十七章病理学常用技术的原理及应用提纲大体与组织病理学技术组织化学与免疫组织化学技术电子显微镜技术原位多聚酶链式反应技术核酸原位杂交技术显微切割技术流式细胞技术比较基因组杂交技术生物芯片技术激光扫描共聚焦显微技术大体与组织病理学技术（一）大体观察主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具，对大体标本的病变性状（形状、大小、重量、色泽、质地、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等）进行细致地解剖、观察、测量、取材和记录，必要时可摄影留作资料。大体观察不仅是病理医师的基本功和正确病理诊断的第一步，也是医学生学习病理学的主要方

2、法之。肿瘤大体观察注意肿瘤的部位，形态、大小、颜色以及与周围组织关系，有无完整或不完整的包膜，测量肿瘤的体积，包括长度、阔度、高度（厘米），实质性肿瘤量直径，浅表部的肿瘤应注意其与皮肤的关系，是否凸出皮面，与皮肤有无粘连，四周有无正常的皮肤组织。注意肿瘤的质地（硬实、中等、软）各处的坚实度是否一致，有无与周围组织粘连的情况。切面应暴露肿瘤的最大面积，以便较全面观察肿瘤内部，巨型肿瘤应多作平行切面；注意肿瘤切面的形状，大小和颜色，在结构上是否均匀一致，有无出血坏死，有无包膜，有无浸润；包埋组织块的选择：根据肿瘤的大小决定包埋组

3、织的块数，原则上选择肿瘤中央；肿瘤边缘与瘤外组织相连部份，包括瘤外组织；肉眼所见的不同性状的各部份；所有淋巴结作包埋。取材检查标本，观察其大小形态、色泽、硬度及肉眼病理改变并进行描述。检查病变部位应按诊断的实际要求取材，组织块厚度不超过0.3cm，大小在22×22mm范围内，放入用铅笔写好号码的组织脱水盒内，每合原则上放一块（小块组织例外），如放入两块以上者，应在组织脱水盒上号码后注明A、B、C……字样，以便区分.制片工作常规【组织处理机脱水程序和时间】10%福尔马林11小时；85%乙醇30分钟；95%乙醇Ⅰ30分钟；95%

4、乙醇Ⅱ30分钟；无水乙醇Ⅰ30分钟；无水乙醇Ⅱ30分钟；无水乙醇Ⅲ30分钟；丙酮20分钟；二甲苯Ⅰ20分钟；二甲苯Ⅱ20分钟；石蜡30分钟；石蜡30分钟。石蜡包埋包埋时先将融蜡倾入模型，然后以钝头热镊夹取组织块，使病灶或指定面向下（包埋分层次的组织在蜡中安放平正。注意防止混杂组织碎屑；组织埋入蜡块中以后，即将该组织的号码小条埋入蜡块一侧；蜡稍凝后，即移入冷水中加速凝固；蜡块的大小，以在组织周围包有1~2mm之蜡为宜。蜡块做成正方形或长0方形，以便切片。石蜡切片法将切片刀装在持刀座上，刀刃与蜡块表面呈50夹角。调整后勿任意变动

5、；将蜡块固定于持蜡器上，并调整蜡块与刀至适当位置；移动刀座或持蜡器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座；以右手匀速旋转机轮，到组织已全部切出，或所需的部分已切出。微小组织应注意勿修切过多。调节厚薄器到4～6um，继续切片，除特殊要求者，一般勿切过厚；以小镊取完整无划痕、厚薄均匀的切片，将其放入温水中，使展平无折，每一蜡块多切数个切面，选择较好的切片裱于载玻片上。需要多个不同水平切面时，应多选切片。水浴温度以低于蜡熔点10~12℃上下为宜；裱片时使切片玻片之间无气泡，切片的位置应端正，裱成后随即在玻片上写上号码；将切片放在烘片板或温箱

6、中烘干；有特殊要求者应按要求切片。染色常规切片脱蜡应彻底，室温较低时更应注意，以切片在二甲苯中呈透明状，或移入乙醇后，片上无白色斑点为佳；特殊染色、组织化学反应，按各方法的要求进行组织固定处理，以保证效果。对酶反应更应严格要求。凡用含升汞固定液固定的组织，于切片脱蜡后，应经脱汞处理，方可染色。其法为：切片经水洗2min，浸于0.5%碘酊溶液中10min，水洗；0.5%硫代硫酸钠水溶5min，用水彻底冲洗；经蒸馏水洗后染色。在脱汞过程中，慎防切片脱落；各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料着色效果常因生产厂和批号不同而异，启用任

7、何新品，均应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中，必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当；染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响。可根据镜下观察所见酌予调整，但对组织化学反应（尤其是酶），其时间、温度等因素务必恒定，且应做对照片。染液着色力显著减退时应更新，染色反应不正常，应检查染液及试剂是否失效或误用；染色过程中，勿使切片干燥，以免影响细胞状态。染色完毕后用显微镜检查染色结果，是否符合要求，并核对标本种类、号码、数量是否无误；火棉胶切片除可做常规染色

8、外，尚可做常用特殊染色及PAS、DNA、RNA等主要组织化学染色。卡红（Carmine）使火棉胶着色，含此染料的染色效果不佳。石蜡切片染色法二甲苯去蜡（经二次）5~10min；无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各1~2min，然后蒸馏水洗3min（换数次）；苏木紫液染色约5min