17 病理学常用技术的原理及应用

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1、第十七章病理学常用技术的原理及应用第一节大体与组织和细胞病理学技术(一)大体观察主要运用肉眼或辅以放大镜、量尺和磅秤等工具．对大体标本的病变性状(形状、大小、重量、色泽、质地、界限、表面及切面形态、与周围组织和器官的关系等)进行细致地剖检、观察、测量、取材和记录，必要时可摄影留作资料。大体观察不仅是病理医师的基本功和正确病理诊断的第一步。也是医学生学习病理学的主要方法之一。(二)组织病理学观察将肉眼确定为病变的组织取材后，以福尔马林(fOmlahn，甲醛)溶液固定和石蜡包埋制成切片，经不同的方法染色后用光学显微镜观察。通过分析、综合病变特点，作出疾病的病理诊断

2、。组织切片最常用的染色方法是苏木素一伊红(}~ematoxylinantleosin，HE)染色。迄今，这种传统的方法仍然是诊断和研究疾病最基本和最常用的方法。若仍不能做出诊断或需要进一步研究时，则可辅以一些特殊染色、免疫组化和其他观察技术。(三)细胞病理学观察通过采集病变处的细胞，涂片染色后进行观察、诊断。细胞的来源可以是运用各种采集器在口腔、食管、鼻咽部、女性生殖道等病变部位直接采集的脱落细胞，也可以是自然分泌物(如痰、乳腺溢液、前列腺液)、体液(胸腹腔积液、心包积液和脑积液)及排泄物(如尿)中的细胞，以及通过内镜采集的细胞或用细针直接穿刺病变部位(如乳腺

3、、甲状腺、前列腺、淋巴结、胰腺、肝、肾等)，即细针穿刺(fineneecUeaspiI-ation，FNlA)所吸取的细胞。细胞学检查除了用于病人外，还用于肿瘤的普查。该方法设备简单，操作简便，病人痛苦少易于接受，但最后确定是否为恶性病变尚需进一步经活检证实。此外，细胞学检查还可用于对激素水平的测定(如阴道脱落细胞涂片)及为细胞培养和DNA提取’等提供标本。第二节组织化学与免疫组织化学技术(一)组织化学(histochemistry)一般称为特殊染色，通过应用某些能与组织或细胞的化学成分进行特异性结合的显色试剂．定位地显示病变组织、细胞的特殊化学成分(如蛋白质

4、、酶类、核酸、糖类、脂类等)，同时又能保存组织原有的形态改变，达到形态与代谢的结合。如用过碘酸schiff反应(PAS)显示细胞内糖原的变化；用苏丹Ⅲ染色显示细胞内的脂肪滴等。在肿瘤的诊断和鉴别诊断中也可用特殊染色方法。如用PAS染色可区别骨Ewing肉瘤和恶性淋巴瘤，前者含有糖原而呈阳性，后者不含糖原呈阴性；用磷钨酸苏木素(PTAH)染色可显示横纹肌肉瘤中瘤细胞胞质内的横纹。(二)免疫组织化学与免疫细胞化学(irrlmLJnohistochem‘lst吖andimrTlUrlOCytOCrlelTlistry)免疫组织化学(免疫组化)和免疫细胞化学是利用抗原

5、抗体的特异性结合反应来检测和定位组织或细胞中的某种化学物质的一种技术，由免疫学和传统的组织化学相结合而形成。免疫组化染色技术不仅有较高的敏感性和特异性，同时具有将形态学改变与功能、代谢变化结合起来，直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上原位确定某些蛋白质或多肽类物质的存在的特点，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析技术或激光扫描共聚焦显微技术等，可对被检测物质进行定量分析。1．免疫组化染色方法和检测系统免疫组化染色方法有很多，按标记物的性质可分为荧光法(荧光素标记)、酶法(辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶等)、免疫金银及铁标记技术等：按染色步骤可分为直

6、接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原一抗体结合，如PAP法和标记的葡聚糖聚合物(1abeleddextranpolymer’，LDP)法．以及亲和连接，如ABC法、标记的链亲和素一生物素(1abeledstreptavidin—biotin．LSAB)法等，其中LSAB法和LDP法是最常使用的方法。两步LDP法即Envision法．具有省时、操作简便、受内源性生物素干扰少等优点，但成本高于LSAB法。免疫组化染色常用的检测显示系统见表17—1。最常用的检测显示系统是辣根过氧化物酶(HRP)一二甲基联苯胺(DAB)系统，阳性信号

7、呈棕色细颗粒状。2．免疫组化染色的反应结果和质量控制免疫组化中常见的抗原表达模式有以下几种(图17—1)：①细胞膜线性阳性反应，大多数淋巴细胞分化抗原定位于细胞膜，如c1920、CD3等的标记呈细胞膜线性阳性反应；②细胞质的阳性反应，根据抗原的亚细胞结构定位不同，又有数种表现形式，如细胞角蛋白(cytoker。atin，cK)以及一些中间丝蛋白(vimentirl)。主要分布在近细胞膜处的胞质内；cDl5和cD30等抗体的染色呈胞质内局限性点状阳性反应；bcl一2蛋白等定位于线粒体的抗原常表现为细胞质内弥漫性阳性反应；③细胞核阳性反应，如I(i一67、雌激素受

8、体(ER．)蛋白、孕激素受体(PR)蛋