GB 4789.5-1994 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB食品卫生微生物学检验4789.5一94志贺氏菌检验储GB4789.5--84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofShigella1主肠内容与适用范围本标准规定了食品中志贺菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材科3.1天平:称取检样用。3.2均质器或乳钵。3.3温箱。3.4显微镜。3.5灭菌广口瓶:500mL,3.6灭菌三

2、角烧瓶:500mL,250mL,3.7灭菌平皿:90mmX15mm,3.8载玻片。3.9酒精灯。3.10灭菌金属匙或玻璃棒。3.1，接种棒，镍铬丝。3.12试管架，试管篓。3.13硝酸纤维素滤膜:150mmX50mm,00.45pm;Irw`用时切成两张，每张70mmX50mm，用铅笔划格，每格6mmX6mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4培养荃和试荆月月﹃十…CN增菌液:按GB4789.28中4.17规定。月八q了‘HE琼脂:按GB4789.28中4.21规定。月﹃叼JSS琼脂:按GB4789.28中4.22

3、规定。月月﹃乌…麦康凯琼脂:按GB4789.28中4.24规定。月反﹃J伊红美蓝琼脂(EMB):按GB4789.28中4.25规定。月户咔b三糖铁琼脂(TSI):按GB4789.28中4.26,4.27规定。中华人民共和国卫生部1994一03-18批准1994一09一01实施GB4789.5一944.7葡萄糖半固体管:按GB4789.28中4.31规定。4.8半固体管:按GB4789.28中4.30规定。4.9葡萄搪按琼脂:按GB4789.28中3.8规定。4.10尿素琼脂(pH7.2):按GB4789.28中3

4、.15规定。4.11西蒙氏柠檬酸盐琼脂:按GB4789.28中3.5规定。4.12氰化钾(KCN)培养基:按GB4789.28中3.16规定。4.13氨基酸脱v酶试验培养基:赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基，按GB4789.28中3.12规定。4.14糖发醉管:棉子糖、甘露醇、甘油、七叶昔及水杨昔，按GB4789.28中3.2规定4.155%乳糖发酵管:按GB4789.28中4.32规定。4.16蛋白陈水、靛基质试剂:按GB4789.28中3.13规定4.17志贺氏菌属诊断血清。5检验程序志贺氏菌检验程序如下:检样25

5、g+GN225.L36士1'C.6^8hHE琼脂或SS麦康凯或EMB36土I'C.18---24h挑取可疑有落TSI,葡萄搪半固体TSI底层产酸，斜面产碱.H2S-非如左述的不产气，无动力各种反应结果血清学分型进一步的生化试验生化分群试验葡萄格被试验、西蒙氏柠像酸盐、赖氨酸、尿众,KCN、水扬普和七叶普志贺氏菌属荀萄箱按+分群及分型结果或任何其他阳性结果非志贺氏菌非志贺氏菌报告476GB4789.5一946操作步软6.1增菌称取检样25g，加人装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800

6、0-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6^-8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。6.2分离和初步生化试验6.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个;另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个，于36℃培养18-24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳搪的菌落。6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三搪铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑JL个菌落，以防遗漏，经36℃

7、培养18^24h，分别观察结果。6.2.3下述培养物可以弃去:a.在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物;b.在18^24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物;c.不分解有萄糖和只生长在半固体表面的培养物;d.产气的培养物;e.有动力的培养物;f.产生硫化氢的培养物。6，24凡是乳糖、蔗糖不发醉，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。6.3血清学分型和进一步的生化试验6.3.1血清学分型挑取三精铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由

8、于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查;如果呈现凝集，则用A1,A2,B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1,2,3分别检查，并进一步用1^15各型因子血清