《微生物技术部分》PPT课件

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1、（二）无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1、目的：防止外来杂菌入侵，获得纯净培养物p152、方面：p15*实验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒*微生物培养的器皿、接种工具和培养基灭菌*实验操作在酒精灯火焰附近进行*避免已经经过灭菌处理的材料与周围物品接触比较含义常用方法消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包括芽孢和孢子。p15灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。p15高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌煮沸消毒法；巴氏消毒法；化学药剂消毒；定义常用方法处理对象消毒使用较为温和的物理或

2、化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸玻璃仪器巴氏消毒法不耐高温的液体紫外线实验室、操作台化学药剂消毒：如酒精溶液手，操作台等灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子培养基、棉塞、玻璃仪器等接种环、涂布器玻璃仪器3、灭菌与消毒：高压蒸汽灼烧干热定义常用方法微生物培养和组培中的应用消毒使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸玻璃仪器紫外线实验室、操作台、衣物等酒精溶液手、外植体等次氯酸钠溶液等外植体灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等灼烧接种环、涂布器干热玻璃仪器121℃，

3、100kPa，15~30min接种用具、试管口、瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，160-170℃下加热1-2h。二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种配制培养基称量计算溶化物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL电子天平和称量纸调节PH溶化营养→琼脂（搅拌）→加水定容→调节PH高压蒸汽灭菌二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高

4、压蒸汽倒平板60℃左右，酒精棉球擦手，点酒精灯；操作过程倒平板微生物的接种（纯化）单菌落二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法平板划线法随着划线的进行，接种环上的微生物细胞的数量将逐渐减少，并分散开。经培养后，可在平板表面得到单菌落。接种：划线灼烧接种环→取菌液→划线分离→烧至暗红接种：划线①④③②划线分离平板划线的操作方法交叉划线法连续划线法划线方法稀释涂布平板法A.系列稀释操作P19101102103104105106(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。(2)用移液

5、管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。B.涂布平板操作P19二、基本操作程序（以大肠杆菌的纯化为例）配制培养基包装器材灭菌菌种扩增倒平板接种倒置培养观察、记录、分析保存菌种高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法恒温培养箱平板和一个未接种的平板，恒温37℃倒置培养恒温箱中培养原液稀释101倍稀释103倍稀释102倍菌种的保存（1）临时保藏固体斜面培养基：4℃，3~6月转接新培养基（2）长期保藏甘油管藏：菌液：灭菌甘油=1：1混合，-20℃芽孢A、某些细菌在其生长

6、发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体，称为芽孢被埋在琥珀中达2500万年的芽孢，当放到营养培养基上时仍可萌发生长。39微量移液器的使用第一档第二档严禁超越两端极限量程使用结束后，将刻度调回最大量程一档吸二档排40微量移液器的使用41