miR144在心肌细胞死亡中的功能研究

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1、中国科学院大学UniversityofChineseAcademyofSciences硕士学位论文2013年05月By-ZhangLinAThesisSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofCellBiologyInstituteofZoologyMay,2013II本人郑重说明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引

2、用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：弓长乏7}；：卜日期：弛I弓年5月31日任何收存和保管本论文各种版本的单位和个人，未经本论文作者及导师授权，不得将本论文转借他人并复制、抄录、拍照、或以任何方式传播。否则，引起有碍作者著作权益之问题，将可能承担法律责任。致谢时光飞逝，转眼我已到毕业的时候了。在动物所的研究生学习期间，我收获良多。如果到了要离开的时候，我想起还有许多想做的事情没来得及做

3、，心中不免有小小的遗憾。在研究生学习中，许多人给了我帮助和鼓励。让我充满感激的，是实验室的每一位成员。首先要感谢我的毕业论文指导老师李培峰研究员，感谢他对我的栽培和指导。特别要感谢的是对我的课题、实验进行指导的王建勋、王昆和焦建琴老师。我的硕士学习的完成离不开他们的指导。本课题还得到了研究生丁素玲、李倩、周露屿、龙波、李娜等师姐师兄和孙腾、张晓洁、刘翠云、范圆圆、冯畅、等同学在细胞制备和培养、Realtime．PCR、免疫荧光染色方面提供的技术指导以及高桂峰、韩伟、袁树民、张恒艾、刘防、王胤等博士后们给予的帮助、指导和支持。最后要感谢动物

4、所研究生处的侯晓霞、刘晓明、张丽英、沈慧等老师给我日常学习生活提供的帮助。在此一并表示感谢!III摘要心肌细胞死亡会导致工作心肌细胞的数量减少，造成心肌的收缩力下降。在心脏的发育和病理过程中，MicroRNAs起着重要的调节作用，其在心肌细胞中的调节是影响心脏生理功能的关键。miR一144作为一种高度保守的MicroRNA，在心肌细胞中有比较高的表达水平。其靶基因PTEN涉及心肌细胞死亡信号通路。本实验从大鼠基因组中扩增出包含有Pri—miR-144的基因组序列以构建miR一144腺病毒载体，使用该病毒感染H9C2心肌细胞系，发现miR．

5、144能减缓H202或缺氧诱导的细胞死亡作用，并能对抗缺氧诱导心肌细胞线粒体分裂。双荧光素酶法、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测的结果表明miR-144的过表达确实能够降低肿瘤抑制因子PTEN(phosphataseandtensinhomologdeletedoncMomosometen)的表达。这说明miR-144可能通过靶向PTEN参与心肌细胞的死亡的调控。关键词：心肌细胞死亡；miR-144；PTENIVABSTRACTAsterminaldifferentiatedcells，cardiomyocytesdeathisclo

6、selyrelatedtothenumberofworkcellsintheheart．Thedeathofcardiomyocytes，includingapoptosisandnecrosis，isacriticalfactortothefunction，especiallysystolicfunction，ofheartsMicroRNAsplayimportantrolesintheregulationsofaseriesofdevelopmentalandpathologicaleventsofheart．miR-144，asa

7、conservativeMicroRNA，hasahighexpressionintheheart，andoneofitstargets⋯PTENisinvolvedinthepathwaysofcardiomyocytedeath．IclonedPri—miR一144fromthegenomeofrat,andconstructedmiR-144adenovirusrAd—miR-144)．IfoundthatoverexpressionofmiR一144couldimproveH9C2cellssurviralunderH9C2ori

8、schemiastimulation．UsingRealtimePCRandWesternBlotting，IvalidatedthatPTEN(phosphataseandtensinhom