《凝胶层析》PPT课件

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1、层析CHROMATOGRAPHY掌握：凝胶的结构与性质凝胶层析的基本原理装层析柱的过程及装柱要求熟悉：层析技术的分类凝胶层析的特点层析的概念、一般原理了解：凝胶的选择柱、样品、洗脱液的选择凝胶的保存一.概述层析Chromatography(色谱),利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲合力等)，使各组分在支持物上集中分布在不同区域，借此将各组分分离。层析法进行时有两个相，一个相称为固定相(Stationaryphase)，另一相称为流动相(Mobilephase)。由于各组分所受固定相的阻

2、力和流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得到分离。二.层析技术的分类1.按两相所处的状态分类以液体作为流动相的层析称为液相层析，以气体作为流动相的称为气相层析。其固定相也可有两种状态，一种是以固体作为吸附剂的固定相，另一种是以涂布在固体载体表面的液体作为固定相。层析气相层析（gas-chromatography）液相层析（liquid-chromatography）气-固层析（gas-solidchromatography）气-液层析（gas-liquidchromatography）液-固层析（liquid-solidchr

3、omatography）液-液层析（liquid-liquidchromatography）2.按层析过程的机制可分为.吸附层析(adsorptionchromatography)----利用吸附剂对不同组分吸附能力的不同加以分离的方法。.分配层析(partitionchromatography)----利用不同组分在流动相和固定相中的分配系数不同而进行分离的方法。.离子交换层析（ion-exchangechromatography）----利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和力不同而进行层析分离的方法。.凝胶层析（gelchromato

4、graphy）----利用不同组分之间分子大小不同，在通过凝胶介质时所受到的阻滞作用的差异而进行分离的方法。.亲和层析（affinitychromatography）----利用生物大分子之间特有亲和力的不同进分离纯化的方法。3.按操作技术形式分类.柱层析（columchromatography）----将固定相装在层析柱中，使样品朝着一个方向移动，通过各组分随流动相流动而得到分离的方法。纸层析（paperchrmatography）----用纸作为液体的载体，样品点在纸上随后展开达到分离鉴定的方法。.薄层层析（thinlayperchr

5、omatography）----将适当的吸附剂在玻璃板或其他材料薄板上铺成薄层，样品点在上面随后用流动相展开达到分离鉴定的方法。三.层析的一般原理二、塔板理论最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。凝胶层析GelChromatography一、定义凝胶层析…是按照被分离物质分子大小,经过具有一定孔径的多孔物质进行分离的一种方法。其又称为凝胶过滤或分子筛过滤或排阻层析。主要机理是分子筛效应,当被分离物质流经凝胶柱时,因各组份的分子大小不同

6、,在凝胶受到的阻滞作用有差异,从而造成各组分在凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。二.基本原理流动相（洗脱液）固定相（凝胶）原理：被分离物质中各组分的分子量不同。进入具有一定孔径的凝胶柱后,较大的分子不能进入凝胶孔隙中,被排阻在外,而较小的分子则能进入凝胶孔隙,加入洗脱剂后,大分子就随洗脱剂从凝胶间隙洗脱下来,受到的阻力小,其流速较快,小分子物质从上一层凝胶孔隙中出来又扩散到下一层凝胶孔隙中,这样多次反复,大分子物质先从柱中流出,小分子物质后流出。小分子由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留,大分子被排阻在凝胶颗粒外面,在颗粒之间迅速通过。三、常用术语

7、1．固定相固定相是由层析基质组成的。其基质包括：固体物质(如吸附剂、离子交换剂)液体物质(如固定在纤维素或硅胶上的溶液)，这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。2．流动相在层析过程中推动固定相上的物质向一定方向移动的液体或气体称为流动相。在柱层析时，流动相又称洗脱剂或洗涤剂(即推动有效成分或杂质向一定方面移动的溶液)。在薄层层析时，流动相又称展层剂。3．层析以基质为固定相(柱状或薄层状)，以液体或气体为流动相，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附或交换作用，最终结果是使混合物得到分离。4．操作容量即在特定条件下，

8、某种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量；一般以每克(或毫升)基质结合某种成分的毫摩尔数或毫克数来表示。(mmol/g,mg