重组单抗药物的非还原电泳纯度分析

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1、中国生物制品学杂志2010年1月第23卷第1期ChinJBiologicalsJanuary2010，Vol.23No.1·83·中国图书分类号R392-33文献标识码A文章编号1004-5503（2010）01-0083-04【实验技术】重组单抗药物的非还原电泳纯度分析程立均魏敬双张世雄李耿贾茜【摘要】目的对重组单抗药物的非还原电泳纯度进行分析，排除样品制备过程中形成的一些假象。方法结合重组单抗的分子结构特征，改变常规SDS-PAGE条件，将抗体样品在不同的缓冲液及电泳条件下进行比较。结果抗体在非还原SDS-PAGE纯度检测中出现的次带，可通过在供试品缓冲液中加入烷

2、基化试剂封闭自由巯基而几乎全部消除；通过降低电泳过程的环境温度，可有效降低主带上方高相对分子质量带的出现。结论单抗药物中由于含有多对二硫键引起的一些因电泳样品制备而形成的假象带，可以通过试验方法的修正而去除。【关键词】重组单抗；非还原SDS-PAGE；纯度；二硫键AnalysisofNon-reducedSDS-PAGEPurityofRecombinantMonoclonalAnti－bodyCHENGLi-jun,WEIJing-shuang,ZHANGShi-xiong,etal（NewDrugR&DCenter,NorthChinaPharmaceutical

3、Corporation,Shijiazhuang050015,China）【Abstract】ObjectiveToanalyzethenon-reducedSDS-PAGEpurityofrecombinantmonoclonalantibody（McAb）andex－cludetheartifactsformedduringpreparationoftestsamples.MethodsTheconditionforroutineSDS-PAGEwasmodifiedbasedonthestructuralcharactersofrecombinantMcAbmo

4、lecules.TherecombinantMcAbsamplesweretreatedwithvariousloadingbuffersundervariousconditionsforSDS-PAGE,andtheresultswerecompared.ResultsAlmostalltheminorbandsappearedduringdeter－minationofpurityofMcAbbynon-reducedSDS-PAGEwereeliminatedbyadditionofalkylationreagentintotestsamplebuffertob

5、lockthefreesufhydrylgroups.Theminorbandswithhighrelativemolecularmasscouldbediminishedeffectivelybydecreasingtheambienttemperatureduringnon-reducedSDS-PAGE.ConclusionTheartifactsformedduringpreparationoftestsamplesduetothedisulfidebondsinMcAbmaybeeliminatedbymodificationofconditionforno

6、n-reducedSDS-PAGE.【Keywords】Recombinantmonoclonalantibody;Non-reducedSDS-PAGE;Purity;Disulfidebond在重组蛋白质药物质量控制过程中，SDS-PAGE0801）及理化测定对照品（批号20051101，浓度是蛋白质药物纯度分析的常用手段。重组人源抗狂2mg／ml）均由本公司制备；Enbrel（TNFr-Fc融合蛋犬病病毒单抗（Recombinanthumananti-rabiesvirus白，Amgen公司产品）和Avastin（抗血管内皮生长因monoclonalantibo

7、dy，rhRMcAb）是采用基因工程技子单抗，Genentech公司产品）均由杭州安瑞普生物术，用CHO细胞表达的全人源抗体，属于IgG1亚公司惠赠。［1，2］型，用于狂犬病暴露后的预防。在rhRMcAb药1.2主要试剂及仪器物研发过程中发现，在非还原电泳条件下，除抗体主HRP标记的羊抗人IgGFc抗体、羊抗人IgG带外，在高相对分子质量及低相对分子质量处，分别Fab抗体及HRP标记的兔抗羊IgG抗体均购自Sig－存在一些次带。本文对单抗在非还原电泳检测时的ma公司；PVDF电转膜为Millipore公司产品；SDS-这些特殊表现进行了分析，为单克隆