AKTIP基因真核表达载体的构建及其在GES-1细胞中的表达

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1、第四军医大学学报(JFourthMilMedUniv)2008，29(23)http：／／journa1．fmmu．edu．ca2127·研究原著·文章编号：1000-2790(2008)23-2127-04AKTIP基因真核表达载体的构建及其在GES．1细胞中的表达利荣乔，黄俏佳(南京军区福州总医院分子医学研究中心，福建福州350025)Constructionofeukaryoticexpression达载体，并成功地在GES．1细胞中进行了表达，为进一步研究AKTIP的功能和结构奠定了基础．vectorofAKTIPgeneandits

2、expres-【关键词】蛋白激酶B相互作用蛋白；逆转录一PCR；基因克sioninGES．1cells隆；基因转染；蛋白质印迹技术L／Rong—Qiao，HUANGQiao—Jia【中图号】Q556【文献标识码】ACenterforMolecularMedicine，FuzhouGeneralHospital，NanjingMilitaryAreaCommand，Fuzhou350025，China0引言蛋白激酶B相互作用蛋白(AKTinteractingpro—【Abstract】AIM：Toconstructeukaryoticexpre

3、ssionvectorofthetein，AKTIP)是近年来发现的一种细胞膜蛋白质⋯．geneofAKTinteractingprotein(AKTIP)andtodetectitsexpres—AKTIP可直接或问接作用于蛋白激酶B(proteinki．sioninGES一1cells．METH0DS：TotalRNAwasextractedfromnaseB，PKB或Akt)，通过增强Akt的磷酸化调节Akthumanperipheralblood．ThefulllengthcDNAofAKTIPgene的活性，从而参与磷脂酰肌醇-3激

4、酶(PI3K)／Akt信wasamplifiedbyRT—PCR，andthenclonedintopcDNA3．1／号通路的调控J．到目前为止，有关AKTIP的研究myc—His(一)AvectorbynIandNheIrestrictiveenzymesites．Thegenewasidentifiedandcomfirmedbysequencing，andwas文献报道很少，其确切的结构及生物学功能尚未完全thentransfectedintoGES一1cells，andtheexpressedAKTIPpro—清楚．我们利用基因克隆技

5、术构建AKTIP基因的真teinwasdetectedbyWesternblotanalysis．RESULTS：These—核表达载体并进行AKTIP蛋白的体外表达，为进一qencingresultconfirmedtheeukaryoticexpressionvectorof步研究其结构和功能奠定基础．AKTIPwascorrectlyconstructed，andtheresultofWesternblotshowedithadagoodexpressioninGES一1cells．CONCLUSION：1材料和方法pcDNA3．1／m

6、yc—His(一)A—AKTIPhasbeensuccessfully1．1材料PCR引物由上海超世生物科技有限公constructed，whichcanhaveagoodexpressioninGES一1cells．司合成；DH5(x菌种为本实验室保存；pcDNA3．1／Thisstudywillprovideafoundationforfurtherinvestigationonthemyc—His(一)A空质粒、DMEM培养基、胰酶及真核细functionandmolecularconstitutionofAKTIP．胞转染试剂Lipo

7、fectamineⅢ2000为Invitrogen公司产【Keywords】AKTIP；RT—PCR；genecloning；genetransfection；WesterRblot品；全血RNA提取试剂盒、质粒DNA小抽和大抽提试剂盒及DNA凝胶回收试剂盒为TIANGEN公司产【摘要】目的：构建人蛋白激酶B相互作用蛋白(AKTIP)基品；AMV逆转录酶、nI，NheI限制性内切酶和T4．因编码区序列(cDNA)的真核表达载体，观察其在GES一1细胞DNA连接酶、GES一1细胞株(永生化的正常胃黏膜细中的表达．方法：从健康人外周血中提取总RN

8、A，应用RT—胞)，RIPAI细胞强裂解液、胎牛血清、PVDF膜和PCR方法扩增AKTIPcDNA的全长序列后克隆入pcDNA3．1／ECL化学发光底物、脱脂奶粉及