GB15193.6-2003 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验.pdf

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1、ICS07.100C53中华人民共和国国家标准GB15193.6-2003代替GB15193.6-1994A甫乳动物骨髓细胞染色体畸变试验Mammalianbonemarrowcellchromosomeaberrationtest2003-09-24发布2004-05-01实施中华人民共和国卫生部发布中国国家标准化管理委员会GB15193.6-2003前言本标准全文强制本标准代替GB15193.6-1994《骨髓细胞染色体畸变试验》本标准与GB15193.6-1994相比的主要修改如下:—将标准名称“骨髓

2、细胞染色体畸变试验”改为“哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验”;—在“范围”中增加了受试物的具体内容:食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等;增加不适用范围;—将原操作步骤中“5.1动物处理”标题下的有关内容分列为“试验动物”、“剂量及分组”和“操作步骤”三章;—增加章题“试验动物”，将“取健

3、康成年大、小鼠”改为“常用健康年轻的成年大鼠或小鼠”;—增加章题“剂量及分组”，并将高剂量组的设计方法增加一条“急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)求不出LDs。时高剂量组则按以下顺序a)10g/kg体重;b)人的可能摄人量的10。倍;或c一次最大灌胃刘量进行设计”;增加参考阳性对照物“丝裂霉素CO.5mg/kg体重~2.0mg/kg体重)，或环磷酞胺(40mg/kg体重)”;—将原"5.1.2”剂量设计以外的内容放在增加的“操作步骤”标题下，并在此标题下增加“受试物配制”的有关内容

4、;—增加“结果判定”内容自本标准实施之日起，GB15193.6-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、哈尔滨医科大学、杭州市卫生防疫站。本标准主要起草人:韩驰、唐玲光、袁振华。本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB15193.6-2003哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验范围本标准规定了哺乳动物骨1im染色体畸变试验的基本技术要求本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因

5、素对大、小鼠骨髓细胞的遗传毒性，检验对象包括食品添加剂(含营养强化剂)、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等本标准不适用于有证据表明受试物或反应代谢产物达不到靶组织(targettissue)-骨髓的情况，2原理染色体是细胞核中具有特殊结构和遗传功能的小体，当化学物质作用于细胞周期G1期和s期时，诱发染色体型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给试验的大、小鼠腹腔注人秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成

6、，以便增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩知、分散，轮廓清晰.在显微镜下观察染色体数口和形态3仪器与试剂全部试剂除注明外均为分析纯，试验用水为燕馏水3.10.1%秋水仙素:笠于棕色瓶中，冰箱保存3.22.2%柠檬酸钠3.3pH7.4磷酸盐缓冲液3.3.11/15mol/L磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠(NaeHPO,A47g溶于1000mL蒸馏水中3.3.21/15mol/L磷酸二氢钾溶液:磷酸二氢钾(KH.,PO,)49.07g溶于1000m1-燕馏水中3.3.3将磷酸氢二钠溶液80ml与磷酸二氢钾溶液20

7、mL混合，用pH计测定并调节pFI至7.43.40.075mol/L氯化钾溶液。3.5甲醇(分析纯):冰乙酸(分析纯)以3，1混合，临用时现配3.6Giemsa溶液3.6.1Giemsa储备液:取Giemsa染料3.8g,置玛瑙乳钵中，加少量甲醇研磨，逐渐加甲醇至375mL溶解后再加125mL纯甘油，于370C温箱保温48h在此期间摇动数次放置1周-2周过滤备用3.6.2Giemsa应用液:取1m工储备液加入10,LpH7.4磷酸缓冲液374V器与设各寒盼室常用设备、恒温水洛锅(37℃士50C),离心机、生

8、物显微镜，4实验动物常用健康年轻的成年大鼠或小鼠。每组用两种性别的动物至少各5只。动物购买后适应环境至少3天5荆量及分组受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量，一般可取工/2LD,，低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4和1/8LD。作为中、低剂量急性毒性试验给予受试物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃容量)动物无死亡而求不出LD。时，高剂量组则按以51GB15193