资源描述：
《泽蛙的性腺分化及温度对性别决定的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、泽蛙的性腺分化及温度对性别决定的影响动物学报ActaZoologicaSinica主讲人：主要内容1材料与方法2结果与分析动物的性别决定和性分化一直是生物学领域颇受关注的课题之一。目前已经知道,脊椎动物的性别决定机制主要有遗传性决定(Geneticsexdetermination,GSD)和环境性决定(Environmentalsexdetermination,ESD)两大类。有关温度对两栖类性腺分化影响的研究,早在20世纪初就有过报道。用高温32℃±2℃培育美洲林蛙(Ranasylvatica)的蝌蚪,发现有雄性化的趋势。以后在北非肋突螈(Pleurodele
2、spoireti)、冠欧螈和滞育小鲵(Hynobiusretardatus)等一些(Trituruscristatus)两栖类,都有相类似的报道。在我国,有关两栖类的性腺分化以及温度对性腺分化影响的研究极少,仅中国林蛙(Ranatemporariachensinensis)有这方面的报道(李新红等,2001)。泽蛙(Ranalimnocharis)体型小、分布广,是我国南方常见的种类。其生殖期较长,每年的4-9月都可以从野外获得性腺发育成熟的雌、雄蛙进行人工催产,获得受精卵,因此是进行发育生物学实验的好材料。本文采用不同温度培育泽蛙的性别尚未分化的蝌蚪,观察在不
3、同温度条件下,蝌蚪的发育状况、性分化规律以及雌、雄性比变化,探讨温度对泽蛙性腺分化的影响。1材料与方法1.1实验材料的获得泽蛙捕获自福州市郊城门镇农田。2006-2007两年在泽蛙的繁殖季节(4-9月),挑选性腺发育成熟的雌蛙共150只,每批次人工催产雌蛙20-30只,获产率90.5%。1.2不同水温的培育方法将同一批次刚孵出蝌蚪(Gosner25期)随机分成5组,每组150尾,其中4组为实验组,分别设定为18℃±1℃、30℃±1℃±、32℃±1℃±、34℃±1℃温度处理组;在自然水温23℃-25℃中发育的则为对照组。1.3取材及组织学制片按上述方法另外培育一批
4、每批次的蝌蚪,用以定期取样,制作组织学切片,观察原始生殖细胞的迁移、生殖嵴的形成以及性腺分化。采用Bouin液固定组织,常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋;制作连续横切片,切片厚7um,HE染色。切片标本置显微镜(配冷光源数码相机)下观察、拍照。对完成变态的幼蛙,进行解剖区分精巢或卵巢结构。1.4数据分析对于测量数据以平均值±标准差(Mean±SD)表示。以Spss13.0统计学软件对实验数据进行V2测验(V2-Test),主要比较各实验组幼蛙的成活率和雄性率与对照组的差异显著性(P<0.05为差异显著)。2结果与分析2.1性腺发生及分化泽蛙的性腺分化以对照
5、组23℃±25℃的为准。从孵化期蝌蚪开始至完成变态的幼蛙为止,体内原生殖细胞(Primordialgermcells,PGCs)的迁移、生殖嵴和原始性腺形成,以及性腺分化过程如下述2.1.1原生殖细胞的迁移和原始性腺的形成刚孵出的蝌蚪,观察蝌蚪躯干部过前肾和消化道的连续横切片,背大动脉之下腹膜上皮与消化道之间的背肠系膜上,可发现PGCs单个分布(图I:1),数量很少。PGCs呈圆形或椭圆形,胞体明显较其周围的体细胞大,胞径均值(长径x短径,下同)为10.8umx8.8um,核径均值为6.8umx5.2um。核大,着色浅,核膜清晰可见,核仁1-2个。孵化后1d蝌蚪
6、,全长6.5mm±0.3mm。切片观察,PGCs已迁移到背肠系膜两侧的腹膜上皮上,仍旧单个分布,胞径均值为11.4umx8.2um,核径均值5.9umx4.6um。4d蝌蚪,全长7.7mm±0.6mm。在中肾管下方,靠近背大动脉的腹膜上皮上,左右两侧各向腹腔突出形成1对纵行隆起,此为生殖嵴(Germinalridge)。刚出现的生殖嵴很小,由体细胞和PGCs构成。在生殖嵴中可以观察到1-2个PGCs(图I:5)。PGCs的胞径均值16.1umx12.2um,核径均值13.5umx10.5um。6d蝌蚪,全长912mm±0.5mm。生殖嵴体积略有增大,生殖嵴中的P
7、GCs的数量增加,在一个切面上最多可见到5个PGCs(图I:6)。PGCs体积有所变小,胞径均值为14.6umx11.0um,核径均值10.6umx6.4um。从6d蝌蚪至12d蝌蚪,生殖嵴变化不大。17d蝌蚪,全长17.2mm±0.8mm。生殖嵴中的PGCs和体细胞数量继续增多,体积增大。在生殖嵴中央出现了一个小腔隙,为初生性腔(Primarycavity)。PGCs和体细胞位于腔隙的周围。此时的生殖嵴可改称为原始性腺(Primordialgonad)。原始性腺横切面呈梨形。背方狭窄,通过背系膜悬挂于中肾管下的腹膜上皮两侧(图I:7)。观察期所有的蝌蚪切片标本
8、,在原始性腺中都有大小不
