温度对鲫鱼性别决定的影响及分子机制探讨

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1、福建师范大学硕士学位论文温度对鲫鱼性别决定的影响及分子机制探讨姓名：岳敏娟申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：林丹军20090601摘要本文采用组织学方法观察了鲫鱼(Carassiusauratus)原生殖细胞的迁移、生殖嵴形成和性腺分化。用免疫组织化学方法，检测了对照组(23,--．,25)。C和高温组(30-3：1)。C鱼苗性腺组织中芳香化酶的活性定位，并用实时荧光定量PCR方法检测了对照组(23"一25)*C和高温组(30-3：1)*C鱼苗性腺分化不同时期P450aromA基因的表达情况，探讨温度对性腺分化的影响。实验

2、结果显示，孵化后12"-'40d是鲫鱼性腺分化的敏感期。从第12d起，仔鱼分成7组，每组分别用下列7种水温中的一种培育28d：(16士1)℃、(20-3：1)*C、(23"---25)*C、(27士1)℃、(30-3：1)。C、(32士1)。C、(34士1)℃。其中(23,---,25)。C组是对照组。实验结束后统计雌雄性比，对照组平I(20-3：1)*C组幼鱼的雌雄比例大致是1：1(分别是1：1．07和1．09：1)。在(27士1)℃组，雌性率上升，为55．3％(P

3、率达40．8％。然而，在高温组(30-3：1)。C、(32士1)℃、(34士1)℃中，雌雄比例分别是6．14：1、2．51：1和2．14：1。其中(30-a：I)。C实验组的雌性率最高，达到86．O％fP

4、高的水温会促进P450aromA基因的表达，提高芳香化酶的活性，使得鲫鱼往雌性化的方向发育。关键词鲫鱼，温度，性腺分化，雌性率，P450aromA基因中文文摘在探讨动物的性别决定(sexdetermination)和性分化(sexdifferentiation)的机制中发现，尽管鱼类性别决定的基因型在受精时就已经形成了，但是鱼类作为一种低等脊椎动物，其生活环境千差万别，这决定了其性别决定方式的多样化和可塑性。鱼类的性别是由遗传因素和环境因素相互作用共同决定的。在诸多的环境因素中，研究较多的是温度对性腺分化的影响。不同的温度可诱导不同

5、种鱼类的性腺向雄性或雌性分化。如在高温(36℃)下，奥利亚罗非鱼(Oreochromisaureus)雄性率可达98％；在(32士1)℃下，泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)雄性率可达90％。而在一些鱼类则相反，如南美洲的另一种银汉鱼(Odontesthesbonariensis)在低温(17℃)下，雌性率达100％，在高温(29℃)下则为O％。鲫鱼(Carassiusauratus)是江河湖泊中常见具有较高经济价值的淡水鱼类。有关鲫鱼的性腺分化尚未见有报道。本文采用不同温度对鲫鱼性未分化的仔鱼进行培育，观察

6、在所设定的温度条件下，性腺的形成和分化规律，探讨不同温度对性腺分化和子代性比的影响。并用免疫组织化学和实时荧光定量PCR的方法检测不同分化时期对照组(23--一25)℃和高温组(30士1)℃鲫鱼性腺中芳香化酶表达的情况。(1)鲫鱼性腺分化的规律：通过组织切片的方法，观察在自然水温下，鲫鱼原始生殖细胞的迁移和分化，实验结果表明：1日龄仔鱼，在消化道中肠的脏壁中胚层上，可见PGCs单个或几个细胞聚集分布。3日龄仔鱼，PGCs已迁移至中肠上方的背肠系膜处。5日龄仔鱼，PGCs迁移到靠近背方的腹膜上皮，在8日龄的仔鱼纵切片中，可观察到PGC

7、s沿着腹膜上皮分散分布，其分布的起点在鳔管末端的下方，直至延伸到后肠的背方。12日龄仔鱼，生殖嵴(genitalridges)l习1]形成，位于两侧肾管下方的腹膜上皮上。16日龄稚鱼，PGCs已迁移至生殖嵴内，原始性腺(primordialgonads)形成。在20"-'25日龄稚鱼的原始性腺中，PGCs数量仍然很少，但是其体积略有增大，在PGCs外可见体细胞包绕。30日龄幼鱼，性腺开始分化，能从组织切片的形态上区分出精巢和卵巢。精巢呈梨形，通过系膜垂直悬挂在背方的腹膜之下，在性腺中没有较大的腔隙，但有一些毛细血管。卵巢较大，背方紧

8、贴腹膜上皮。其背侧可见一较大的腔隙，此即为初生性腔(primarycavity)。40日龄幼鱼，精巢中，仅有精原细胞，在卵巢中，除了卵原细胞外，还有一些早期初级卵母细胞。50日龄幼鱼的卵巢中充满卵原细胞和卵母细胞，在几个生殖细胞外有产