双配体修饰壳聚糖药物载体的合成及肝靶向性能研究

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1、分类号——UDC．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．密级学校代码!鳢窆Z武多凄理歹大薯学位论文英文——SynthesisandLiverTargetingPerformanceof——题Et——Dual-ligandModifiedChitosanasaDrugCarrier一研究生姓名睦厘塑指导教师姓名———』立盗—一职称—j蛆些L申请学位级别亟±学科专业名称挝盘垄墨墨猩论文提交Et期2Q12生三旦论文答辩Et期2Q12生§月学位授予单位盍垫墨王盘鲎学位授予日期答辩委员会主席评阅人2012年5月独创性声

2、明ltllllllllIllIllIlllY2100159本人声明，所呈交的论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得武汉理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文使用授权书本人完全了解武汉理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授

3、权武汉理工大学可以将本学位论文的全部内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存或汇编本学位论文。同时授权经武汉理工大学认可的国家有关机构或论文数据库使用或收录本学位论文，并向社会公众提供信息服务。(保密的论文在解密后应遵守此规定)研究生(签名)：硌．7辜否船师(签名)：彳卉日期中文摘要目前，国内外关于肝靶向给药系统中药物载体的研究主要集中在单配体修饰的载药纳米粒子方面。然而，单个配体修饰的纳米粒子在进行受体．配体相互作用时易受到许多病理及生理条件的变化而变化，这种变化会导致受体特异性识别能力和结合活性降低

4、，针对这种情况，本文提出了一种双配体修饰的药物载体材料，期望能提高主动靶向的可靠性，丰富肝靶向给药系统的内容。本文将具有肝靶向性的配体甘草次酸(GA)和乳糖酸(LA)偶联到壳聚糖(CTS)上，首次成功合成了双配体修饰壳聚糖材料一乳糖酸化甘草次酸壳聚糖(GCGA)，该材料结构未见文献报道。通过MTT实验考察了材料的细胞毒性，并用FITC标记的壳聚糖纳米粒子(FITC．CTSNPs)、甘草次酸壳聚糖纳米粒子(FITC．GA．CTSNVs)和GCGA纳米粒子(FITC．GCGANPs)研究了GCGA肝靶向性能，并分析了GCGANPs

5、的主动靶向机制。在中心复合设计研究中，优化了GCGA／5．FuNPs的制备条件，探讨了GCGA／5．FuNPs的体外释放特性。得到如下结论：(1)红外光谱(Ⅸ)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、接触角测试和MTT实验结果表明，GA和LA通过酰胺键成功连接到CTS，取代度分别为13．77m01％和16．74m01％；GCGA是一种亲水性较强的具有疏水性GA基团和亲水性LA基团的两亲性药物载体材料，可通过自组装法得到纳米粒子；CJCGA对小鼠成纤维细胞的(L929)的毒性与其浓度的高低具有一定的关系，GCGA的浓度在0．005．0．

6、05mg／ml范围内时，无细胞毒副作用。(2)体外细胞摄取实验结果表明，FITC．GCGANPs进入肝癌细胞和去唾液酸糖蛋白受体(ASGP．R)及甘草次酸受体介导的内吞作用有关，当一种受体介导的内吞作用因某种病理生理原因受阻时，还有另一种配体．受体的相互作用，增加了细胞的摄取途径；BEL．7402肝癌细胞摄取GCGA纳米粒子的量是L02正常肝细胞的18．22倍，GCGA纳米粒子对肝癌细胞具有更强的亲和性。大鼠体内分布研究显示，FITC．GCGANPs对心、脑和骨骼肌没有毒副作用，而且较FITC．CTSNPs和FITC．GA-C

7、TSNPs，FITC．GCGANPs主要在大鼠肝脏富集，具有更强的肝靶向性。因此，GCGA可以作为一种有应用前景的肝癌靶向性药物载体材料。(3)中心复合设计优化CTS载5．Fu纳米粒子(CTS／5．FuNPs)的平均粒径和载药量，以及以此为模型，制备了GCGA／5．FuNPs，实验结果表明：5-Fu／CTS对平均粒径和载药量具有显著的影响；GCGA／5．FuNPs的形貌均呈圆整球形，平均粒径为239．9nna(分布范围在100．500rim)，分布均匀(多分散指数为0．04)，zeta电位为+21．2mV，载药量为3．90％(

8、w／v)。GCGA／5．FuNPs体外释放研究结果显示，CrCGA／5．FuN．Ps在PBS缓冲溶液(pH=7．4)释放过程大致分为四个阶段，即突释、缓释、二次突释，最后是一个非常缓慢的释放阶段。其缓释效果明显优于纯5．Fu，因此，GCGANPs作为药物控释系统中的纳米药物载