补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨HIRA、ASF1a表达的影响

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1、2011年11月第28卷第6期广州中医药大学学报November2011，Vo1．28，No．6JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine627补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨HIRA、ASF1a表达的影响林一峰，梁祖建，李彩华(广州中医药大学附属骨伤科医院，广东广州510240)摘要：【目的】探讨补肾活血方对膝骨关节炎大鼠关节软骨衰老信号分子HIRA、ASF1a表达的影响。【方法】选用雌性sD大鼠，随机分为假手术组、模型组和中药组；采用切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带法复制骨关节炎动物模型，术后第4周开始灌

2、服补肾活血中药，模型组、假手术组灌服等量的生理盐水，分别于术后8、12、16周取材，采用骨关节炎软骨病理变化评价系统(OARSI)评价关节软骨的病变，运用westernblot法检测HIRA、ASFla表达水平。【结果】术后8、12、16周，模型组OARSI评分较假手术组显著升高，差异有显著性意义(P<0．01)，中药组OARSI评分较模型组显著降低，差异有显著意义(P<0．05)；HIRA、ASF1a在模型组中表达明显增强，补肾活血中药能下调HIRA、ASFIa的表达。【结论】补肾活血方可通过下调HIRA、ASF1a表达保护关节软骨。关键词：骨关节炎／中药疗法；补肾活血方／药理

3、学；软骨，关节／病理学；疾病模型，动物；大鼠中图分类号：R285．5文献标志码：A文章编号：1007—3213(2011)06—0627—04软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞成分，广泛司)，Trizol总RNA提取试剂(美国Invitrogen公介导关节软骨代谢的调节。软骨细胞的老化、凋亡司)，SF300塑料薄膜封口机(温州兴业公司)，在关节软骨的维持、再建、塑形、更新中起重要作倒置相差显微镜(Et本Olympus公司)，SWCJIF用，是关节软骨退变导致骨关节炎(osteoarthritis，超净台(苏州净化设备有限公司)，TGLI8R冷冻OA)发生发展的重要机制¨J。研究表明衰

4、老相关离心机(珠海黑马医学仪器有限公司)，DYY2C型异染色质聚集(senescence—associated电泳仪、迷你型垂直电泳槽、半干转移槽(北京heterochromaticfoci，SAHF)的发现对软骨细胞的六一仪器厂)，精密天平(瑞典Ohaus公司)，增殖、分化以及衰老具有重要的作用，已成为OAGeneAmp2400PCR扩增仪(美国Invitrogen公发病机制研究的新热点。衰老信号分子HIRA／司)。ASF1a介导的SAHF的形成是驱使软骨细胞衰老的1．3药物制备补肾活血方组成：补骨脂20g，分子机制。前期研究表明：补肾活血方能促怀牛膝20g，龟板30g，桑寄生

5、30g，鸡血藤30g，进软骨细胞增殖，调控软骨细胞凋亡，明显修复或阿胶20g，丹参10g，当归10g，黄芪30g，白芍延缓骨关节炎的关节软骨病损，但补肾活血方防治30g，熟地黄30g，仙鹳草10g，地龙15g，其提OA的分子机制尚不清楚。本研究观察补肾活血方取物按照人与大鼠体表面积折算，含生药量对HIRA、ASF1a表达的影响，以期阐明补肾活血0．8377g／mL(由广州中医药大学附属骨伤科医院方防治OA的作用机理，为I临床应用提供实验依制剂室提供)；氯化钠注射液(上海华原股份有限据，现报道如下。公司生产，产品批号：04110101)。1．4实验分组、造模与给药大鼠随机分为假手1

6、材料与方法术组、模型组和中药组，每组10只，用100mg／L1．1实验动物清洁级健康雌性SD大鼠30只，5水合氯醛溶液按3．3mL／kg腹腔注射，5rain后麻月龄，体质量260～290g，由广州中医药大学实验醉完全，模型组和补肾活血方组经背部切口切除大动物中心提供(合格证号：0058908)。鼠双侧卵巢4j，切断右膝交叉韧带，行抽屉试1．2主要试剂及仪器聚偏氟乙烯(PVDF)膜验阳性后彻底止血，逐层缝合；假手术组经背部切(美国Bio—Rad公司)，超敏发光液(北京利莱公口将大鼠卵巢从腹腔提出，仅切除卵巢周围少量脂收稿日期：2011—05—12作者简介：林一峰(1958一)，男，

7、主任中医师基金项目：广东省科技厅社会发展项目(编号：2007B031400004)628广州中医药大学学报肪，切除卵巢，切开右膝关节处皮肤，不切断前体，保鲜膜包裹，x光片感光10min，影，定后交叉韧带。所有伤口在缝合前均滴入少量的青霉影，冲洗，晾干，拍照。素溶液。术后分笼饲养，连续3d给予青霉素溶液1．7统计方法采用SPSS13．0统计软件进行统4×10U／d肌注。所有SD大鼠均喂养在恒温、恒计学分析，各测得值采用样本均数(-4-S)表示，湿的清洁环境中，环境温度为(25±1)