痉挛性截瘫蛋白21对乙型肝炎病毒复制的影响及其机制

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1、中华肝脏病杂志2011年10月第l9卷第l0期ChinJHepatol，October2011，Vo1．19，No．10747病毒幽干炎·痉挛性截瘫蛋白21对乙型肝炎病毒复制的影响及其机制高国生翁彭剑李永燕丁世雄【摘要】目的探讨人痉挛性截瘫蛋白21(SPG21)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响，并探讨其调节机制。方法将HBV感染性克隆pHBV1．3及其启动子pHBV—Luc分别转染HepG2细胞，加入不同浓度的SPG21蛋白，采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg含量；RT—PCR和Westernblot法检测ItepG2细胞内HBV核心蛋白mRNA和蛋白表

2、达；荧光定量PCR法检测细胞闭合环状DNA(cccDNA)的水平；采用Luminometer荧光检测仪分析HBV启动子活性的变化。实验数据用均数±标准差(元±s)表示，组间比较采用t检验。结果SPG21能够上调细胞上清液中HBsAg和HBeAg的含量，同时能够促进细胞内HBV核心蛋白的表达和HBVcccDNA的产生，并上调HBV启动子活性，其调节作用呈剂量依赖效应；与对照组比较，加入50g／ml，100g／ml，200g／mlSPG21蛋白48h后，HBV启动子上调倍数分别为1．63、3．09和4．66(尸<0．05)。结论SPG21能够促进HBV在HepG2细胞中的复制。【关

3、键词】肝炎病毒，乙型；重组人痉挛性截瘫蛋白21；复制Studyoftheefectandmechanismofspasticparaplegia21proteinonthereplicationofhepatitisBvirusGAOGuo-sheng,WENGPeng-jian，LIYong-yan，DINGShi-xiong．TheInfectiousDiseaseHospitalofNingbo，theNO．2HospitalofNingbo,NingboZhejiang315010,China．Email：495926992@qq．corn[Abstract]Objec

4、tiveTostudytheeffectofhumanspasticparaplegia21protein(SPG21)onthereplicationofhepatitisBviru(HBV)anditsregulatorymechanism．MethodsHBVinfectiousclonepHBV1．3anditspromoterpHBV-LucweretransfectedrespectivelyintoHepG2cellswithSPG21ofdifferentconcentrations，HBsAgandHBeAginthesupernatantsweremeas~

5、edbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)，expressionofHBVcoremRNAandproteinweredetectedbyRT-PCRandwesternblot，covalentlyclosedcircularDNA(cccDNA)levelsweremeasuredbyreal—timePCR，andHBVpromoteractivitywasmeasuredbyluminometerfluorescencedetector．ResultsExpressionofHBsAg，HBeAg，HBVcoreproteinan

6、dcccDNAwereupregulatedbySPG2laswellasHBVpromoteractivityinadose—dependentapproach．TheactivityofHBVpromoterincreasedto1．63．3．09and4．66timesinHepG2cellstreatedwith50jag／ml，lOOpg／mland20C’lag／mlSPG21respectivelyduring48hour-treatedf尸<0．05)，ascomparedtothecontrolgroup．ConclusionsSPG21canenhancet

7、hereplicationofHBVinHepG2cells．[Keywords]HepatitisBvirus；Spasticparaplegia21protein；Replication流行病学调查显示，HBV是导致肝细胞癌(HCC)VEGF)和人基质金属蛋白酶9(MMP9)等相关蛋白形成的最主要因素Ⅲ。HBV编码的X蛋白(HBX)在的表达，进而促进HCC的发生和转移。诱导肝癌形成中发挥了至关重要的作用。HBX能够促在前期工作中，我们发现HBX能够促进重组人进血管生成因子(vasaJla