京尼平改善高脂饮食诱导的高血脂症并降低肝脏脂质堆积的分子机制研究

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1、■纖繼龜号Ｗ５〇：１５１２８密级卿—：ｆ南京砰疮式学博士学位论文觀京尼平改善高脂饮食诱导的高血脂症并降低肝脏脂质堆积的分子机制研究研宄生：仲红指导教师：刘畅教授培养单位：生命科学学院一级学科：生物学＝级学科：馳生鮮完成时间：２０１８年３月３日答辩时间：２０１８年５月２１日学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作和取得的研宄成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表

2、或撰写过的研宄成果。其他同志对本研宄所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。》学位论文作者签名：Ｗ日期：＞〇１夂学位论文使用授权声明研宄生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：公开保密期限为年。学位论文作者签名：指导教师签名：

3、日期：日期ｍｍ摘要近年来，随着社会的发展和人民生活水平的提高，人们的膳食结构和生活方式也随之改变，长期过多地摄入高热能的食物以及久坐少动的不良生活方式使人们体内积累过多的脂肪而导致肥胖。脂肪组织和其它器官如心脏、肝脏及骨骼肌＇中异常过量的脂肪堆积会导致代谢方面的脂毒性，造成慢性低程度的炎症反应和一代谢功能紊乱，增加系列慢性疾病的风险，如心血管疾病、高血压、血脂紊乱、２型糖尿病、非酒精性脂肪肝以及癌症等。如何降低体重，减少肥胖相关的代谢紊乱的发生，是当下亟待解决的公共健康问题。京尼平是栀子的有效成分，常作为传统中药治疗糖尿病，。但

4、是其是否能够改善营养过剩导致的高血脂症和脂肪肝，如何调控脂质代谢，目前尚不清楚。ｈ－ｉｈｆａｔｄｔＨＦＤ）喂养的肥，通过本实验以高脂食物（ｉｅｇ，胖小鼠为研究对象灌胃不同剂量的京尼平来分析其对营养过量导致的肥胖和代谢紊乱的影响。每周测量小鼠的体重和饮食量，并通过代谢笼系统检测小鼠的呼吸熵（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｕｏｔｉｅｎｔＲＱ）、（ｅｎｅｒｇｅｘｅｎｄｉｔｕｒｅＥＥ）、（ｏｘｅｎｃｏｎｓｕｍｔｉｏｎｑ，能量消耗ｙｐ，耗氧量ｙｇｐ，Ｖ０２）和活动量，分析小鼠基础代谢指标。此外，检测小鼠血液和肝脏中脂质含量，确定其对脂质代谢的影响，还可以通过免

5、疫组化实验，观测小鼠肝脏。同时一中的脂滴储存情况。为了进步探宂京尼平调控脂质代谢的分子机制，我们检测了京尼平处理的小鼠和原代肝细胞中脂质代谢相关基因在ｍＲＮＡ和蛋白水平表达量的变化。并且对京尼平处理的原代肝细胞进行油红染色和甘油三脂（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＣ）含量测定，在功能上确认京尼平对脂质代谢的调控作用。因ｉ为小ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｍＲＮＡｓ）在调控脂质稳态中起重要作用，我们推测其，在京尼平调控脂质代谢中也发挥重要作用。通过生物信息学分析了调控脂质基因表达的ｍｉＲＮＡｓ，验证其对靶基因的调控作用，并检测其是否受京尼平的调控。并

6、且通过荧光素酶报告系统实验ｉ，确定其靶向调控基因的序列。结合ｍＲＮＡｓｍｉｍｉｃｈｉｂｉ，ｉ和ｉｎｔｏｒ的转染实验探究ｍＲＮＡｓ在京尼平调控的脂质代谢中的介导作用。我们的研宄发现，在ＨＦＤ喂食的肥胖小鼠中，京尼平可以剂量依赖性地降，而对小鼠的饮食量没有影响，低小鼠体重。此外代谢笼检测结果发现京尼平还能增加小鼠的Ｖ０２、ＥＥ和活动量。说明京尼平可能通过增加小鼠的能量代谢来降低体重。不仅如此，对京尼平可以显著性地降低肥胖小鼠血液和肝脏中脂质的含量，改善高血脂症并降低肝脏内脂质堆积。在分子水平上，我们检测了小鼠肝脏组织中参与脂质代谢基因的表达，发现京尼

7、平在ｍＲＮＡ水平可以特异性地抑制脂质合成基因的表达，。在分离的原代肝细胞中京尼平也可以剂量依赖性地抑ＩＭ制游离脂肪酸（ｆｒｅｅｆａｔｙａｃｉｄｓ，ＦＦＡｓ）上调的脂质合成基因的表达。用生物信息’－７ＵＴＲ学分析耙向５＾印￡？３非转录区（ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｉｏｎｓｓ）的ｍｉＲＮＡｓｇ，并经，－－实验验证其受到京尼平的调控。结果发现，京尼平可以上调ｍｉＲ１４２ａ５ｐ的表达。’－Ｒ－２ａ－如ｉｃ３ＴＲ而且，荧光素酶报告系统实验结果显示，ｍ