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时间:2019-05-17
《Arenobufagin抑制前列腺癌细胞转移的作用及分子机制研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、暨南大学硕士毕业论文题目(中英对照):Arenobufagin抑制前列腺癌细胞转移的作用及分子机制研究Studyontheeffectandmolecularmechanismofmetastasesinhibitionbyarenobufagininprostatecancercells作者姓名:陈丽萍指导教师姓名叶文才张冬梅及学位、职称:博士教授博士研究员学科、专业名称:药学药物化学学位类型:科学学位论文提交日期:2018年6月论文答辩日期:2018年5月23日答辩委员会主席:陈哲生教授论文评阅人:庞建新教授朱孝峰
2、研究员学位授予单位和日期:暨南大学2018年6月30日暨南大学硕士毕业论文中文摘要研究背景和目的:上皮-间质转化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT)在前列腺癌转移中扮演着重要角色,因此,开发EMT抑制剂可能是治疗转移性前列腺癌的可行策略。Arenobufagin是本课题组从蟾酥中分离得到的抗肿瘤药物先导物,能抑制多种实体肿瘤的增殖。本课题的目的是评价arenobufagin能否抑制前列腺癌PC3细胞的EMT和转移,并揭示其作用机制。研究方法:(1)MTT法检测arenobufag
3、in对PC3细胞的非毒剂量;(2)罗丹明-鬼笔环肽染色实验观察细胞骨架的变化;(3)蛋白免疫印迹法检测PC3细胞EMT标志物的表达水平;(4)Woundhealing实验和Transwell实验评价arenobufagin对PC3细胞迁移、侵袭能力的影响;(5)免疫荧光实验观察arenobufagin对β-catenin核转位的影响;(6)qPCR检测β-catenin/TCF/LEF-1复合物相关靶基因的mRNA水平;(7)双荧光素酶报告基因实验检测β-catenin/TCF/LEF-1复合物的转录活性;(8)在PC
4、3细胞上瞬时转染β-catenin过表达质粒和β-cateninsiRNA,考察β-catenin在arenobufagin介导的EMT抑制作用中扮演的角色;(9)构建裸鼠皮下异移植瘤模型和肺转移瘤模型,体内评价arenobufagin抑制PC3细胞EMT和转移的活性;免疫组化法检测异移植瘤EMT相关蛋白的表达水平;HE染色观察肺组织转移灶的形成以及各脏器组织的病理情况。研究结果:MTT实验测得arenobufagin对PC3细胞的非毒剂量为8nM,即细胞增殖抑制率为10%对应的药物浓度;罗丹明-鬼笔环肽染色实验结果显
5、示,arenobufagin处理前后,PC3细胞的形态由间质表型(纺锤体型)转换成上皮表型(圆形);蛋白免疫印迹结果显示,arenobufagin下调间质表型标志物(ZEB1、N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug和Twist1),上调上皮表型标志物(E-cadherin、ZO-1和Claudin-1)的表达;Woundhealing实验和Transwell实验结果显示,arenobufagin抑制PC3细胞的迁移和侵袭能力;以上结果表明arenobufagin抑制PC3细胞的EMT。另外,are
6、nobufagin下调了PC3细胞β-catenin的mRNA和蛋白水平;免疫荧光实验结果显示,arenobufagin抑制β-catenin的核转位;双荧光素酶报告基因实验结果显示,arenobufagin抑制β-catenin/TCF/LEF-1复合物的转录活性;qPCR结果显示,arenobufagin下调β-catenin/TCF/LEF-1复合物调控的与肿瘤侵袭转移相关的靶基因mRNA水平。β-catenin的过表达和敲低分别拮抗和协同arenobufagin抑制PC3细胞EMT的活性,说明β-catenin
7、参与了arenobufagin抑制PC3细胞EMT的作I暨南大学硕士毕业论文用。体内活性评价数据显示,arenobufagin抑制PC3细胞裸鼠移植瘤的EMT间质标志物,上调上皮标志物的表达,减少肺转移灶的形成,同时arenobufagin对裸鼠各脏器组织无明显损害作用。研究结论:本研究首次揭示arenobufagin通过下调β-catenin抑制PC3细胞EMT,从而抑制前列腺癌细胞的转移,为arenobufagin发展成为治疗转移性前列腺癌的候选药物提供理论依据。关键词:转移性前列腺癌,上皮-间质转化,arenob
8、ufagin,β-cateninII暨南大学硕士毕业论文AbstractBackgroundandObjective:Epithelial-mesenchymaltransition(EMT)playsanimportantroleinprostatecancer(PCa)metastasis.Thus,developmentof
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