家兔移植性肝细胞癌模型的建立研究

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1、、扣陶农业凡学博士学位论史摘要目的建市二乙基亚硝胺(DEN)诱发家兔肝癌模型，获得家兔肝细胞癌裸鼠移植株和细胞系，开展家兔肝细胞癌同品种兔体内移植研究，初步探讨动物移植性肿瘤的可移植性机制，为肝癌研究提供新的实验材料和手段。方法q340只雄性日本大耳白兔，在1／6肝切除手术后，以浓度为o．002％的DEN水溶液代替饮水投喂，4周后DEN浓度降至O．001％，直至实验结束。实验过程中，定期检测血清GOT、GPT、卜—GT及AFP：定期作超声检查：定期处死动物做肝脏病理学动态观察：对存活至23个月的5只动物取直径0．8cm以上的肿瘤性结节(5个，抨)，做HE染色，核仁

2、组成区嗜银相关蛋白染色，以及C．myc、P53蛋白和AFP免疫组化染色，光镜观察；每例肝脏肿瘤周时做透射电镜检查。②以上5只家兔各取】块肿瘤组织接种裰敏，成活的移植瘤在裸鼠体内反复传代，在第10代和第15代对肿瘤的生长特性、病理形态进行观察。另取第4代裸鼠移植瘤体外培养，在培养4个月后检测细胞形态、生长曲线、肿瘤标志物，进行染色体分析、裸鼠成瘤试验。③将建立的裸鼠移植瘤和细胞系分别在家兔皮下、腹腔、肝脏、眼前房接种，同时皮下注射lOmg／kg／d的环孢霉素A(CsA)，观察肿瘤生长情况。此外，还通过对应用大剂量CsA、家兔血清对肿瘤细胞的体外适应诱导和主要组织相容

3、性抗原在肿瘤可移植性中作用机制的探讨，寻找建立家兔移植性肝细胞癌模型的新途径。结果与结论本实验用DEN成功地诱发了家兔肝脏肿瘤，每只家兔应用DEN的总剂量约为4010～4550mg，诱发周期19～20个月，肝癌的发生率为9／11；DEN诱发家兔肝癌的肝脏病理变化过程与诱发大鼠肝癌的变化类似，但是家兔肝脏病理变化各个阶段的病程明显长于大鼠：DEN诱发的家兔肝脏肿瘤均为弥漫性多结节性肿瘤，同一肝脏的不同肿瘤结节性质存在不同：DEN诱发家兔肝癌的发生与c_myc基因祁AFP的过表达以及p53基因的突变有关，本研究结果支持在肝缅胞癌癌变过程中，c—myc基因的异常表达出现

4、较早，p53基因的突变为肿瘤发展后期事件的观点；本研究获得了一个家兔肝细胞癌裸鼠移植株，该瘤株基本保留着原发瘤的形态学特点，分泌AFP。接种操鼠的潜伏期8d左右，成瘤率10／10，生长缓慢，无自发消退；本研究获得了～个家兔肝细胞癌细胞系，该细胞系的细胞呈上皮样形态，染色体众数集中在66～76之阃；兔肝细胞癌裸鼠移植瘤和细胞系在应用10mg／kg／d的CsA条件下，接种同品种家兔未能成活，在CsA的剂量增加至20mg／kg／d时，移植瘤得以生长，但是荷瘤家兔呈恶病质状态；家兔肝细胞癌细胞在体外能够逐渐适应含兔血清的培养液；小鼠移植性肿瘤H22的可移植性与主要组织相容

5、性复合体(H．2)有关，可能是在mRNA至蛋白表达之间的某种调控机制造成了移植性肿瘤H．2分子在细胞表面表述的下调，这些探讨为建立大型动物的移植性肿瘤模型提供了新的思路。关键词：二乙基亚硝胺；兔；肝癌；裸鼠；细胞系2巾国农业大学博士学位论文英文摘要ABSTRACTobiectiveToinducerabbithepatictumorsbydiethylnitrosaminefDEN),thenestablishatransplantabletumorstraininnudemiceandacelllineofhepatocellularcarcinoma(HCC)

6、developedinrabbits，andthenconductthetransplantingresearchofthemamongtherabbitsofsamespecies，andinvestigatethemechanismoftransplantabilityforanimaltumorsprimarily．Methods(1)40maleJapanesewhiterabbitsweredosedO．002％DENsolutionindrinkingwater5d／wkafterabout1／6口artsofhepatectomytramstudyd

7、ay0to28，andthentheDENconcentrationwasreducedro0．001％untiltheendofdosingperiodSerumGOT，GPT’"pGTandAFPweredetermined，theB-scanultrasoundwereperformedatregularintervalsAcertainnumberofrabbitswerenecropsiedregularlytoconducthepatichistopathologicalexamination．For5rabbitswithlifespanover23

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