家兔卵巢移植入自体角膜板层模型的建立

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1、家兔卵巢移植入自体角膜板层模型的建立【关键词】兔关键词:兔;角膜;卵巢;移植1材料和方法1.1材料①雌家兔（本校实验动物中心提供）体质量2.0～2.5kg，双眼正常无病变，卵巢未排卵;②试剂200g?L-1乌拉坦，5g?L-1丁卡因，绒毛膜促性腺激素（9911172，上海生物化学制药厂）;③Alcon板层刀，裂隙灯照像显微镜为德国Opton公司生产.1.2方法①取卵巢皮质200g?L-1乌拉坦麻醉，固定，常规消毒铺单，行剖腹术，取新鲜卵巢组织;②同一只家兔用丁卡因滴眼作局部麻醉，在角巩缘内侧上方处用眼科弯剪刀切开结膜，约90°，分离结膜及结膜下组织，做角膜板层

2、分离，建立隧道接近瞳孔区，大小5mm×4mm;③取一小块卵巢皮质，大小2mm×3mm，并将其置于角膜板层之间，缝合角膜切口及结膜;④术后2.5g?L-1氯霉素滴眼液点眼，3?d-1，po磺胺（0.5g，溶于饮用水中）.次日肌注绒毛膜促性腺激素（250u?kg-1）2wk，并于每日常规裂隙灯观察植入家兔角膜内卵巢皮质情况;⑤实验结束后放血处死家兔，摘出实验眼眼球，100mL?L-1福尔马林固定，常规石蜡切片厚5μm，HE染色，OLYMPUS显微镜观察.2结果术后1d结膜水肿，角膜透明，移植卵巢皮质清晰无变化（图1（略））;术后3d结膜水肿消退，植入的卵巢组织及角

3、膜变化不大;术后7d角膜缝合处与组织间有新生血管形成;术后15d移植卵巢皮质表面有红点生成.显微镜下观察，可见角膜组织结构正常;植入卵巢皮质生长良好，未见较严重的组织坏死;卵泡形状规则，发育正常;未见明显免疫排斥反应.所观察到的卵泡大都处在初级卵泡发育阶段，视野中央为一初级卵泡，内部卵母细胞发育良好，其周由一层立方状或低柱状卵泡细胞包裹，卵泡外周可见数层结缔组织构成的卵泡膜（图2，3（略））.3讨论评价药物对卵巢组织的影响通常是经由卵巢的组织学切片来确定的.利用家兔自体卵巢植入角膜，建立角膜培养卵巢皮质的动物模型在国内外文献中尚未见报道.我们的实验证实:①卵巢

4、自体移植入眼角膜内可以成活;②使用雌激素后可直接观察到植入角膜基质内的卵巢组织出现红点;③组织切片观察，证实植入卵巢组织形态结构正常，有的正处在初级卵泡发育阶段.但是未发现黄体，未找到移植卵巢已排过卵的形态学依据，这个问题有待于进一步探讨.本模型能直接观察药物对卵巢的效应，可作为一种较好的动物模型用于实验研究.作者简介:刘利兵（1957-），男（汉族），山西省太原市人.博士，副教授，主任.Tel.（029）3374764Email.liulibing@fmmu.edu.cn（第四军医大学:1基础部教学实验中心，2学员旅五大队，3西京医院眼科，4西京医院病理科，

5、陕西西安710033）编辑许昌泰收稿日期:2001-06-29作者：刘利兵，孟勇，王洋，杜红俊，马吉献，李青，田琼