EN在血管重建早期的作用PPT课件

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1、RoleofthePhosphatasePTENinEarlyVascularRemodeling磷酸酶PTEN在早期血管重建中的作用发表日期：2013年4月杂志：PLOSONEIF：3.534研究背景及目的磷酸酶PTEN是PI3K（磷脂酰肌醇-3-羟激酶）蛋白激酶B（Akt）信号通路的一种重要的生理学抑制剂，在过去的研究中，我们致力于研究在体内和体外情况下PTEN在血管急性损伤后VSMC凋亡方面的作用。然而，PTEN在血管成形术诱导的血管损伤的早期阶段的作用尚不明了。为了明确该作用机制，我们设计该实验以探究磷酸酶PTEN在早期血管重塑中的作用。技术路线1.体内(

2、颈动脉损伤模型构建)2.体外：成年Wistar大鼠（300g)颈总动脉分离未处理（对照）球囊损伤12h后PTEN表达量检测取材（HcASMC）细胞培养至第六代干预24h转染共转染PTEN/活化的Akt突变体血清不同生长因子周期性拉伸装置H2O2WT-PTEN质粒SiRNA敲出PTEN基因凋亡VSMC数量检测、Akt磷酸化检测VSMC凋亡数量检测3.汇总数据、统计分析、得出结论PTEN表达量检测实验结果报告：图1A-D为了探究血管受损后PTEN的表达及细胞凋亡情况，研究人员对实验大鼠颈动脉进行球囊损伤，12小时后，免疫组化检测各项指标如上图：PTEN(green),

3、apoptoticsmoothmusclecells(TUNELstaining,red)andnuclei(DAPI,blue）由图可知：球扩后损伤较严重的区域PTEN表达量较多，正常细胞数量少、凋亡细胞数量密集（图上半部分）实验结果报告：图1E-Fwesternblot：usingaspecificPTENantibody微管蛋白不同时间点PTEN相对表达量densitometricanalysisofimmunoblots对经/未经球扩后的标本裂解后通过免疫沉淀反应进行PTEN活性检测：ImmunoprecipitationsemployinganIgGis

4、o-antibodyandwithoutadditionofanyantibodiesservedascontrols由图可知：在大鼠颈动脉受损后12H内，PTEN的表达具有时间依赖性（递增）与对照组相比，其活性明显高于未受损的大鼠颈动脉标本。时间依赖性？实验结果报告：图4A-CA:Proteinexpressionwasdeterminedbywesternblotting.DetectionofCdk4servedasaloadingcontrol.SMCtransfectedwithsiRNAtargetingPTENorascrambledcontrolw

5、ereincubatedinbasalmediumintheabsence(B)orpresenceofH2O2(C).SMCweretransfectedasfollows:nontransfected(NT);mocktransfected(withoutsiRNA,butwithlipidcarrier);transfectedwithanon-targeting(scrambled)siRNA(ControlsiRNA);transfectedwithatargetingsiRNAagainstPTEN(PTENsiRNA).由图可知：与对照组相比，经si

6、RNA敲出PTEN基因之后，VSMC的PTEN表达量明显减少，凋亡的SMC数量亦显著减少。敲出PTEN基因后PTEN的表达及凋亡细胞数量变化实验结果报告：图5A-CA：Akt磷酸化检测（westernblot）AnantibodyagainsttotalAkt（PanAkt）wasusedascontrol.B:PI3-K-inhibitorLy294002(50nM)wassupplementedtothemediumfornot-transfectedcells.HcASMCweretransfectedasfollows:nontransfected(NT)

7、;transfectedwithaplasmidcodingforGFP(pGFP);transfectedwithanemptyplasmidwithoutPTEN-cDNA(pControl);transfectedwithaplasmidcodingforPTEN(pPTEN);mocktrans-fected(withoutplasmid,butwithtransfectionreagent).PTEN-andAktco-overexpressionreversesPTENsproapoptoticeffect(C).注：GFP（绿色荧光蛋白）由图可知：与

8、对照组相比