胰腺癌肝转移体外模型的构建

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1、首都医科大学硕士学位论文摘要目的使用旋转细胞培养系统模拟微重力环境，培养人肝组织外植块，并在此基础上将人肝组织外植块和人胰腺癌细胞系BxPC-3混合培养，使胰腺癌细胞在肝组织外植块上生长，从而初步构建胰腺癌肝转移的体外模型。方法1.模拟微重力环境下人肝组织外植块的培养:将肝组织外植块置于旋转细胞培养系统的SOml培养室内进行培养，在额定时间点取肝组织外植块送病理，HE染色观察肝细胞形态和肝组织结构。2.模拟微重力环境下人肝组织外植块和人胰腺癌细胞系BxPC-3的混合培养:将肝组织外植块和胰腺癌细胞系BxPC-3置于旋转细胞培养系统中混合培养，在额定

2、时间点取肝组织外植块送病理，RE染色观察肝组织结构和胰腺癌细胞在肝组织外植块中生长情况。结果通过光学显微镜观察组织学切片显示:1.模拟微重力环境下，肝组织保持正常结构的轮廓，肝细胞形态保持正常，呈条索状排列，可见正常肝小叶细胞索呈放射状排列，汇管区内小叶间动、静脉结构正常。随着培养时间的延长，肝细胞逐渐出现坏死。肝细胞形态和肝组织结构可基本保持至培养第9日，肝细胞处于存活状态。2.人肝组织外植块和人胰腺癌细胞混合培养第1日肝组织外植块周围和管腔内即有胰腺癌细胞粘附并聚集;第3日可见肝组织外植块中有散在癌细胞浸润:第7日可见微小转移灶形成;混合培养第

3、10日，除散在癌巢外，还可见癌组织块形成，胰腺癌肝转移灶、肝细胞形态和肝小叶结构可保持完好，肝细胞处于存活状态。结论使用旋转细胞培养系统模拟微重力环境，培养人肝组织外植块，以及人肝组织外植块和人胰腺癌细胞的混合培养，通过形态首都医科大学硕士学位论文学观察证实在一定时间内，微重力条件下培养的肝组织外植块在维持肝细胞形态和肝组织结构方面具有独特的优越性，在此基础上，经人肝组织外植块和人胰腺癌细胞的混合培养，实现胰腺癌细胞在离体的肝组织外植块上的种植，并向肝组织内浸润性生长，进而形成癌巢、癌组织块，肝细胞和胰腺癌细胞均可保持存活状态，从而初步构建胰腺癌肝

4、转移的体外模型，为体外研究胰腺癌肝转移和浸润机制提供了可能。所培养的肝组织外植块和形成的癌组织块均可保持独特的三维结构。但是，与体内正常的生理环境相比，尽管采用模拟微重力这一新的培养方法，使体外培养条件得到改善，但是体外培养环境仍存在一定的局限性，在方法学等许多方面尚需进一步改进和完善。使用旋转细胞培养系统模拟微重力环境，构建胰腺癌肝转移体外模型，可以用于胰腺癌肝转移过程和机制的研究，具有独特的优点和良好的前景，为体内难以完成或不可能进行的研究提供可能性，给研究胰腺癌细胞和肝组织间的相互关系提供新的方法，在一定程度上可以帮助我们了解胰腺癌的转移和浸

5、润机制。【关键词】微重力，胰腺癌，转移，模型首都医科大学硕士学位论文ABSTRACTBackgroundPancreaticcancerisoneofthemostintractableandleastunderstoodofallhumancancers.Metastasisisthe,ultimatelife-threateningstageofcancer.Thelackofaccuratemodelsystemsallowstheinvitrostudyofthemetastaticprocess.Paget,morethan100year

6、sago,formulatedhisseedandsoilhypothesis(i.e.,thecellsfromagiventumorwould"seed"onlyfavorable"soil"offeredbycertainorgans).Hehypothesizedthatcancercellsmustfindasuitable"soil"inatargetorganformetastasistooccur.However,thecolonizationofdistanttissuesbymicrometastasisformationand

7、subsequentgrowthisstillpoorlyunderstoodduetolackofsuitableexperimentalmodels.Simulatedmicrogravitycultureisatotallynewtissueculturetechnologyanddevelopsgreatlythroughtherecenttenyears.DevelopedatNASA,theRotatingCellCultureSystem(RCCS)isahorizontallyrotated,bubblefreedisposable

8、culturevesselwithdifusiongasexchange.Thesystemprovidesareprod