铁过载催化的氧化应激对间充质干细胞的影响及其作用机制

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1、分类号：R5513密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码学号学科门类又肄眚科矢垮d口—Ⅲa卫耍Ⅱ正玛匹田E匾歪Ⅱ面硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：铁过载催化的氧化应激对间充质干细胞的影响及其作用机制TITLEEffectandmechanismofiron-catalyzedoxidativestressonmesenchymalstemcells一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：卢文艺指导教师：赵明峰导师组成员：李玉明邓琦天津医科大学研究生院二。一三年

2、五月2坼=酣学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：差垫日期：≯哆年j月≯日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：主翅。日期：．)。哆年j月)-日日期：j。心戽j月文13天津医科大学硕士学位论文．中文摘要目的：探讨铁过载催化的氧化应激——活性氧物质(ROS)生成对骨髓间充质干细胞(BM．MSC)及脐带来源间充质干细胞(UC—MSC)的细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡、支持造血细胞集落形成能力的影响及其作用机制。方法：1．

4、体外培养BM．MSC及UC．MSC，向培养液内加入枸橼酸铁铵(FAG)建立体外铁过载模型，并通过检测细胞内不稳定铁池(LIP)的水平验证该模型是否成功。2．分别采用群体倍增时间(DT)检测铁过载BM—MSC、UC．MSC的细胞增殖能力，碘化丙啶(PI)染色方法检测细胞周期，AnnexinV—PI双标法检测细胞凋亡率，用共培养方法检测MSC的造血支持能力。3．采用2’，7’一二氯荧光黄双乙酸盐(DCFHoDA)探针法检测铁过载前后细胞内ROS水平，并进一步通过Westernblot检测ROS相关信号因子磷酸

5、化p38丝裂原活化蛋白激酶(P—p38MAPK)、p38MAPK、蛋白激酶B(AKT)、p53蛋白的表达情况，并应用铁鳌合剂去铁胺(DFO)，抗氧化剂N．乙酰半胱氨酸(NAC)后检测相关蛋白表达的变化。结果：1．用贴壁法培养BM．MSC，三代后细胞形态均一一致，呈成纤维漩涡状贴壁生长，且纯度较高。当给予4009mol／LFAC处理BM．MSC24h后，加铁组BM-MSC的LIP水平明显高于对照组(P

6、别为(35．28+2．64)，(43．20-士3．12)，(48．96+3．36)h，均明显长于对照组(28．80-士1．25)h，同时加铁组BM．MSC的凋亡率(3．51+1．17)％也明显高于对照组(0．66+0．62)％(均P<0．05)。2．相比对照组而言，加铁组BM．MSC细胞内ROS水平明显高于对照组，且ROS的水平随着FAC浓度的增加而增加，在4001Jmol／L浓度下达到最高(P

7、、p53蛋白的表达明显增高，而AKT的表达无明显差异。3．当给予4009mol／L的FAC处理UC．MSC12h后，加铁组的LIP明显高于天津医科大学硕士学位论文对照组，同时加铁组细胞的群体倍增时间亦明显长于对照组(P<0．05)，但传代次数增加2代后两组之间无明显差异(P>0．05)；加铁组UC-MSC出现明显的G0／G1期阻滞，且其凋亡率(12．75+0．32％)明显高于对照组(3．63+0．80％)(’P<0．05)；加铁组UC-MSC与脐血单个核细胞(MNC)分别共培养一周和二周时，其支持MNC形

8、成造血集落的能力均明显低于对照组。4．加铁组UC—MSC内ROS水平明显高于对照组，且ROS的水平呈时间与浓度依赖性，在400p,mol／LFAC浓度下作用12h达到最高值：且通过检测ROS相关的信号通路发现，加铁组UC—MSC的P—p38MAPK、p53蛋白表达水平明显高于对照组，当给予DFO、NAC处理后，UC—MSC细胞内ROS水平及其相关信号通路可被抑制。结论：1．铁过载可抑制BM—MSC及UC．MSC的增殖能力、引起